細(xì)胞水平上定量 ALDH 活性的實(shí)驗(yàn)，第一步往往是挑選一只“趁手”的試劑盒。市面上的產(chǎn)品從顯色法到熒光法、從 96 孔到 384 孔、從凍干粉到即用型液體，差異巨大。下面拆解核心要素，幫助你在采購(gòu)時(shí)一眼看穿參數(shù)背后的真實(shí)含義。

檢測(cè)原理：顯色 vs 熒光，靈敏度差一個(gè)數(shù)量級(jí)

顯色法以 NAD?→NADH 的 340 nm 吸收為信號(hào)，線性范圍 0.05–0.5 mM，適合常規(guī)細(xì)胞裂解液。熒光法利用 NADH 激發(fā) Ex/Em 340/460 nm，靈敏度提升到 0.01 mM，可檢測(cè)低至 103 個(gè)細(xì)胞的 ALDH 活性。若樣本是流式分選的干細(xì)胞亞群，直接選熒光法，避免信號(hào)淹沒(méi)在背景噪聲里。

線性范圍與樣本稀釋?zhuān)簞e讓高活性樣本“爆表”

試劑盒說(shuō)明書(shū)會(huì)給出“線性區(qū)間”——例如 0.1–1.5 mU/mL。拿到這個(gè)數(shù)先算稀釋倍數(shù)：

• 懸浮細(xì)胞 1×10? 個(gè)/mL，裂解后總蛋白 1 mg/mL，ALDH 活性 0.8 mU/mg → 原液 0.8 mU/mL

• 目標(biāo)落在區(qū)間中點(diǎn) 0.75 mU/mL，僅需 1:1 稀釋即可上機(jī)

遇到肝癌組織等高表達(dá)樣本，提前用裂解緩沖液稀釋 5–10 倍，避免信號(hào)超出儀器檢測(cè)上限導(dǎo)致返工。

反應(yīng)緩沖液里的“隱藏陷阱”

NAD? 濃度固定 1 mM 是行業(yè)慣例，但 pH 和離子強(qiáng)度常被忽視。標(biāo)準(zhǔn)配方采用 Tris-HCl pH 8.5，若你的樣本來(lái)自酸性微環(huán)境（如腫瘤核心），pH 漂移 0.3 個(gè)單位即可使 Km 值翻倍。選購(gòu)時(shí)優(yōu)先選含緩沖液獨(dú)立包裝的型號(hào)，可現(xiàn)場(chǎng)微調(diào)至 8.0–8.7。

凍干 vs 液體：穩(wěn)定性與便利性的權(quán)衡

凍干酶粉 4 °C 可存 12 個(gè)月，但復(fù)溶后需在 24 h 內(nèi)用完。液體即用型 4 °C 保存 4 周，適合高通量平臺(tái)每天連續(xù)上機(jī)。對(duì)周期不固定的課題，凍干試劑盒是更經(jīng)濟(jì)的選擇；對(duì)一周跑 3–4 次板的實(shí)驗(yàn)室，液體試劑盒可減少人為復(fù)溶誤差。

兼容性驗(yàn)證：別讓抑制劑偷走信號(hào)

細(xì)胞培養(yǎng)常用的 DMSO、EDTA、β-巰基乙醇都可能抑制 ALDH 活性。購(gòu)買(mǎi)前索取“抑制劑耐受表”，確認(rèn)試劑盒在 0.1% DMSO 或 1 mM EDTA 條件下回收率 ≥90%。若樣本需添加 1% DMSO 溶解藥物，直接選耐受上限 2% 的型號(hào)，省得額外做有機(jī)溶劑對(duì)照。

價(jià)格拆分：把“每孔成本”算到小數(shù)點(diǎn)后兩位

以 96 孔規(guī)格為例：

• A 品牌 ￥2800/100T → 每孔 ￥28

• B 品牌 ￥3200/500T → 每孔 ￥6.4

留意標(biāo)注“T”是反應(yīng)次數(shù)還是孔數(shù)。部分品牌把 100T 拆成 50 孔×2 次反應(yīng)，實(shí)際每孔成本翻倍。