在數字液滴 PCR(ddPCR)技術的發展進程中,關鍵試劑的性能對實驗結果的準確性和可靠性起著決定性作用。伯樂 Biorad 1863005 作為探針法微滴生成油,憑借技術原理、穩定的性能表現以及廣泛的適用性,成為 ddPCR 實驗體系中重要組成部分,為生命科學研究和臨床檢測等領域提供了可靠的技術支持。
Biorad 1863005 的核心功能是輔助實現高效的微滴生成,其原理基于液 - 液界面的物理化學特性 。該微滴生成油具有特定的表面張力和黏度參數,在與樣本溶液混合后,通過微滴發生器的機械作用力(如微流控芯片的剪切力或壓力驅動),樣本溶液被分散成均勻、穩定的納升級微滴 。在這個過程中,微滴生成油在微滴表面形成一層連續的油膜,這層油膜有效降低了微滴之間的表面能,防止微滴相互融合,同時阻止微滴內水分的蒸發和溶質的擴散,為后續的 PCR 反應構建獨立、封閉的微反應單元 。此外,其特殊的化學組成使得微滴在生成過程中不易產生氣泡,確保微滴的均一性和穩定性,為精確的核酸定量奠定基礎。
Biorad 1863005 形成的微滴體系與 PCR 反應高度協同。微滴內包含了 PCR 反應所需的全部組分,如模板 DNA、引物、探針、DNA 聚合酶、dNTPs 以及緩沖液等 。在熱循環過程中,微滴生成油的熱穩定性保證了微滴在高溫(95℃)變性、中溫(55 - 65℃)退火和低溫(72℃)延伸等不同溫度階段的完整性。同時,微滴的封閉特性使得 PCR 反應在相對獨立的環境中進行,有效減少了不同微滴之間的交叉污染,避免了非特異性擴增產物的擴散。這種微滴體系與 PCR 反應的協同作用,使得每個微滴都相當于一個獨立的 PCR 反應單元,通過對大量微滴的統計分析,實現對目標核酸的絕對定量 。
Biorad 1863005 能夠生成高度均一的微滴,其微滴體積變異系數(CV 值)控制在較低水平 。均一的微滴大小確保了每個微滴內所含的核酸模板量、引物探針濃度以及反應試劑濃度基本一致,從而使各個微滴內的 PCR 反應進程和效率相近。在多次熱循環過程中,由該微滴生成油形成的微滴表現出良好的穩定性,微滴的破裂率極低 。即使經歷 40 次以上的熱循環,微滴仍能保持完整的形態和封閉性,有效防止了微滴內反應體系與外界的物質交換,保證了 PCR 反應的準確性和定量結果的可靠性。
該產品與多種 PCR 試劑和設備具有良好的兼容性。在 PCR 試劑方面,無論是不同品牌的 DNA 聚合酶(如 Taq DNA 聚合酶、高保真聚合酶)、引物、探針,還是各種緩沖液體系,都能與 Biorad 1863005 穩定配合,不會出現因試劑不兼容導致的微滴生成異常或 PCR 反應抑制現象 。在設備適配性上,Biorad 1863005 專為 QX100 和 QX200 數字液滴 PCR 系統設計,與對應設備的微滴發生器、熱循環模塊等組件能夠精準匹配,確保微滴生成效率和 PCR 反應效果達到最佳狀態 。這種高兼容性和適配性使得科研人員在選擇實驗試劑和設備時有更大的靈活性,同時也減少了因試劑設備不匹配而帶來的實驗誤差。
伯樂公司嚴格的質量控制體系確保了 Biorad 1863005 穩定的批次一致性 。從原材料的篩選采購到產品的生產包裝,每一個環節都經過精密把控和嚴格檢測。在生產過程中,對微滴生成油的關鍵理化指標(如表面張力、黏度、密度等)進行實時監測和精確調控,確保每一批次產品的性能參數保持高度一致 。通過大量的實驗驗證和質量評估,不同批次的 Biorad 1863005 在相同的實驗條件下,能夠產生數量相近、大小均一的微滴,并且在 PCR 反應后的定量結果差異極小,為科研實驗的可重復性和數據可靠性提供了堅實保障 。
在基因表達分析研究中,Biorad 1863005 發揮著重要作用。科研人員通過 ddPCR 技術,利用該微滴生成油將含有目標基因的樣本溶液分割成大量獨立的微滴,能夠精確檢測基因的拷貝數變化 。例如,在研究腫瘤細胞與正常細胞的基因表達差異時,可對相關基因進行絕對定量分析,準確評估基因表達水平的變化,為揭示腫瘤發生發展的分子機制提供數據支持 。在基因突變檢測方面,Biorad 1863005 構建的微滴體系能夠有效區分野生型和突變型基因,即使是低豐度的突變(如低于 1% 的突變頻率)也能被準確檢測到,為基因功能研究和遺傳疾病診斷提供了高靈敏度的檢測手段 。
在臨床診斷領域,Biorad 1863005 助力實現對病原體核酸的高靈敏度檢測。對于病毒感染性疾病(如乙肝病毒、新冠病毒感染),利用 ddPCR 結合該微滴生成油,能夠準確測定患者樣本中病毒核酸的拷貝數,為疾病的早期診斷、病情評估和治療方案制定提供重要依據 。在腫瘤液體活檢中,通過檢測血漿中的循環腫瘤 DNA(ctDNA),可以實現腫瘤的早期篩查、療效評估和復發監測 。Biorad 1863005 的高穩定性和精確性確保了對 ctDNA 的準確檢測,即使在極低濃度的情況下也能可靠地定量分析,為腫瘤的個性化治療提供關鍵的分子信息 。
在生物技術和制藥研發過程中,Biorad 1863005 可用于重組蛋白藥物的質量控制 。通過對生產過程中宿主細胞殘留 DNA 的定量檢測,能夠評估藥物的安全性和質量。利用 ddPCR 技術結合該微滴生成油,可精確測定殘留 DNA 的含量和片段大小,確保藥物符合相關質量標準 。此外,在基因治療載體的定量分析中,Biorad 1863005 能夠準確測定載體拷貝數,為基因治療藥物的研發和生產提供可靠的質量控制手段,保障基因治療的有效性和安全性 。
樣本與試劑準備:根據實驗需求準備好樣本溶液和 PCR 反應試劑,包括模板 DNA、引物、探針、DNA 聚合酶、dNTPs 以及緩沖液等 。將 Biorad 1863005 微滴生成油從儲存環境中取出,平衡至室溫備用。
微滴生成:按照 QX100 或 QX200 系統的操作說明,將樣本溶液與微滴生成油按照特定比例混合,然后轉移至微滴發生器中,設置合適的參數(如壓力、時間等)進行微滴生成操作 。確保微滴生成過程中無氣泡產生,生成的微滴均勻穩定。
PCR 反應:將生成的微滴轉移至 PCR 反應板中,加入適量的礦物油覆蓋微滴表面,防止微滴蒸發。將反應板放入對應的數字液滴 PCR 系統中,按照預設的熱循環程序進行 PCR 反應 。熱循環參數需根據具體的實驗目的和引物探針特性進行優化設置。
結果分析:PCR 反應結束后,使用 Biorad QX100 或 QX200 系統配套的成像和分析軟件對微滴進行檢測和分析 。通過統計陽性微滴和總微滴的數量,計算目標核酸的拷貝數或相對含量。
儲存條件:Biorad 1863005 應儲存于陰涼、干燥處,避免高溫和陽光直射,儲存溫度建議控制在 2 - 8℃ 。開封后的產品應盡快使用,并注意密封保存,防止微滴生成油揮發或受到污染,影響微滴生成效果。
操作環境:在微滴生成和 PCR 反應過程中,應保持操作環境的潔凈和穩定,避免灰塵、水分等雜質進入反應體系,影響微滴的穩定性和 PCR 反應結果 。建議在超凈工作臺或潔凈環境中進行操作。
實驗優化:不同的樣本類型和實驗目的可能需要對實驗條件進行優化,如微滴生成油與樣本溶液的比例、PCR 反應的熱循環參數等 。在正式實驗前,建議進行預實驗,摸索最佳的實驗條件,以獲得準確可靠的實驗結果。
安全防護:操作過程中應佩戴手套等防護用具,避免微滴生成油接觸皮膚和眼睛。若不慎接觸,應立即用大量清水沖洗,并根據情況就醫處理 。使用后的微滴生成油和相關廢棄物需按照實驗室生物安全和化學廢棄物處理規范進行處置。
伯樂 Biorad 1863005 產品憑借其先進的技術原理、性能優勢和廣泛的應用范圍,在數字液滴 PCR 技術領域占據重要地位。科研人員和臨床工作者通過正確掌握其使用方法和特性,能夠充分發揮該產品的效能,為生命科學研究、臨床診斷和生物技術產業發展提供強有力的支持 。
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