熒光素直接標記的一抗(直接免疫熒光法)
試劑準備:
1.準備熒光標記的一抗和同型對照抗體
2.細胞洗液:含有2%BSA(牛血清白蛋白)、0.1%疊氮鈉的PBS.
3.固定液:1%多聚甲醛PBS液(pH7.2)pH值一定要準確,否則會影響檢測結果。
操作方法:
1.每個樣品取2支流式檢測管,分別注明同型對照和待測,兩管分別加入106-7/100μl個待側細胞(若細胞濃度低或加入的細胞懸液較多,可1200轉/每分鐘,10分鐘低溫離心,棄上清,保證100μl被檢樣品)。
2.同型對照管中加入熒光標記同型對照抗體,做陰性對照;待測管中加入熒光標記的一抗,作為實驗管,各加30μl (按抗體使用說明書,一抗可做選擇幾個梯度1:20、50、100倍稀釋)混勻即可。
3. 4℃度孵育30分鐘,加入細胞洗液,1200轉/每分鐘,10分鐘低溫離心,反復2次。
4.去除上清,控干,加入固定液0.5ml,混勻。
5.上機檢測,先做同型對照,調整電壓至陰性區范圍,再測實驗管即可。
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。