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脂質(zhì)體細胞轉(zhuǎn)染的方法

來源:上海聯(lián)碩生物科技有限公司   2024年10月21日 15:16  

1、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法

陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過靜電作用,將DNA分子包裹入內(nèi),形成DNA脂復合物,也能被表面帶負電的細胞膜吸附,再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,是目前實驗室轉(zhuǎn)染方法之一,其轉(zhuǎn)染率較高,優(yōu)于磷酸鈣法。

2、磷酸鈣共沉淀法

該方法可重復性差,而且磷酸鈣溶液對溫度、pH和緩沖鹽濃度的變化十分敏感,對細胞尤其是原代細胞毒性較大,也不能采用RPMI培養(yǎng)基,因為其含有高濃度的磷酸鹽。

3、電穿孔轉(zhuǎn)染法

電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的小孔促使DNA分子進入胞內(nèi),這種方法就是電穿孔。
當遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時可以用電穿孔法轉(zhuǎn)染。
一般情況下,高電場強度會殺死50%-70% 的細胞。現(xiàn)在針對細胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護劑,可以大大的降低細胞的死亡率,同時提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率。

4、病毒感染

對于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與電穿孔轉(zhuǎn)染都無法成功轉(zhuǎn)染的細胞系可以采用病毒感染,腺病毒,腺相關(guān)病毒,逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體已廣泛用于哺乳動物細胞體內(nèi)外的基因轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染效率比較高,適用于較難轉(zhuǎn)染的細胞。
但是插入的片段長度有一定限制,最重要的是技術(shù)難度比較高,在一般實驗室中很難普及,而且某些病毒起效時間比較慢,跟不上細胞這種快速繁殖的速度,如果只是做簡單細胞系的轉(zhuǎn)染性價比不高。

沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗,理想的方法應根據(jù)細胞類型和實驗需要進行選擇,如果只是在細胞水平做,而且用的是簡單細胞系,那么脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是綜合比較起來不錯的一個方法。


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