表面等離子共振(SPR)技術(shù)實驗步驟主要包括以下幾個階段:
配體的固定:首先需要將待測分子(配體)固定在傳感器芯片表面。這通常通過共價偶聯(lián)或物理吸附實現(xiàn),偶聯(lián)條件(如pH值)需要優(yōu)化以確保配體的穩(wěn)定性和活性 。
樣品的準備:分析物(如蛋白質(zhì)、小分子等)需要以適當濃度和體積準備,以確保能夠與芯片表面的配體有效結(jié)合 。
樣品進樣:將含有分析物的溶液通過微流控系統(tǒng)流過傳感器芯片表面,配體與分析物之間的相互作用會導(dǎo)致SPR角度的變化,這一變化被儀器實時監(jiān)測并記錄 。
數(shù)據(jù)采集:在分析物與配體結(jié)合及隨后的解離過程中,儀器會記錄SPR信號的變化,這些數(shù)據(jù)反映了分子間的相互作用特性 。
芯片再生:實驗結(jié)束后,需要使用適當?shù)娜芤海ㄈ缢嵝曰驂A性溶液)清洗芯片,以去除殘留的分析物,恢復(fù)芯片表面,為下一輪實驗做準備 。
數(shù)據(jù)分析:通過分析軟件處理實驗過程中獲取的SPR信號,可以計算出分子間的結(jié)合親和力、動力學(xué)參數(shù)等,從而得到有關(guān)生物分子相互作用的詳細信息 。
實驗優(yōu)化:根據(jù)實驗結(jié)果調(diào)整樣品濃度、流速等參數(shù),以獲得更準確的實驗數(shù)據(jù) 。
SPR技術(shù)因其無需標記、實時監(jiān)測、靈敏度高等特點,在藥物篩選、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究、抗體-抗原結(jié)合等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用和重要價值 。
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