表面等離子共振(SPR)技術實驗步驟主要包括以下幾個階段:
配體的固定:首先需要將待測分子(配體)固定在傳感器芯片表面。這通常通過共價偶聯或物理吸附實現,偶聯條件(如pH值)需要優化以確保配體的穩定性和活性 。
樣品的準備:分析物(如蛋白質、小分子等)需要以適當濃度和體積準備,以確保能夠與芯片表面的配體有效結合 。
樣品進樣:將含有分析物的溶液通過微流控系統流過傳感器芯片表面,配體與分析物之間的相互作用會導致SPR角度的變化,這一變化被儀器實時監測并記錄 。
數據采集:在分析物與配體結合及隨后的解離過程中,儀器會記錄SPR信號的變化,這些數據反映了分子間的相互作用特性 。
芯片再生:實驗結束后,需要使用適當的溶液(如酸性或堿性溶液)清洗芯片,以去除殘留的分析物,恢復芯片表面,為下一輪實驗做準備 。
數據分析:通過分析軟件處理實驗過程中獲取的SPR信號,可以計算出分子間的結合親和力、動力學參數等,從而得到有關生物分子相互作用的詳細信息 。
實驗優化:根據實驗結果調整樣品濃度、流速等參數,以獲得更準確的實驗數據 。
SPR技術因其無需標記、實時監測、靈敏度高等特點,在藥物篩選、蛋白質-蛋白質相互作用研究、抗體-抗原結合等領域具有廣泛應用和重要價值 。
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