實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞爬片的準(zhǔn)備及操作
細(xì)胞爬片的準(zhǔn)備
1、蓋玻片的選擇:
爬片可用一般的蓋玻片,也可用專用細(xì)胞爬片(價(jià)格比較昂貴)但是細(xì)胞貼壁牢固,拍出照片效果好。
2、爬片的剪裁:
可根據(jù)自己的需要,到染色時(shí)再將之切開,這樣既保證了細(xì)胞均一性,又可同時(shí)做幾個(gè)指標(biāo)的染色剪裁成合適大小,置于6孔板、12孔板或24孔板。
3、爬片的使用前處理:
將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再置于無水酒清中浸泡6小時(shí),再用三蒸水沖洗3遍。
細(xì)胞爬片的操作
1、胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)重懸細(xì)胞于培養(yǎng)基中。
2、加細(xì)胞前,根據(jù)玻片的大小,先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,然后放玻片,防止加細(xì)胞懸液時(shí)玻片漂起,造成雙層細(xì)胞貼片。
3、根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度接入培養(yǎng)板內(nèi)即可。
4、待細(xì)胞貼壁后,可去上清加含藥培養(yǎng)基。
5、按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),作用一定時(shí)間后取玻片。
取玻片時(shí)由于玻片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊,張力較大,一般將注射器針頭針尖向背面弄個(gè)小鉤,這樣將爬片輕輕勾起,用小鑷子取出就可以了。
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