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微載體免疫技術

來源:斯譜瑞(上海)生物科技有限公司   2024年04月23日 15:05  

微載體免疫技術

 

為進一步提高血清學反應的敏感性,加速對被檢標本結果的報告時間,可應用免疫微載體作為診斷液進行檢測。這種診斷液系將已知抗體吸附在紅細胞、炭粉或乳膠等微載體上,制成所謂的固相抗體,它是一種仍保持抗體特性的固態診斷血清,用它進行間接凝集反應時,不但可與相應抗原發生特異結合,同時也可使吸附抗體的微量載體聚集在一起,這樣可使肉眼難以觀察到的微量抗原抗體結合物,尤其是微量的可溶性抗原-抗體結合物,形成肉眼可見的反應產物,因而明顯地提高了血清學反應的敏感性,反應中的微載體起著“放大器”作用。

(一) 間接紅細胞凝集試驗 即將已知的抗體球蛋白掛在經醛化鞣酸化處理的紅細胞上,制成所謂的致敏紅細胞診斷液,用以實施反向間接血凝試驗,即在反應板孔內,如診斷液與被檢的相應抗原相遇時,紅細胞即被凝集,形成鋸齒狀凝塊沉于孔底,即為陽性反應,否則紅細胞自然下沉,于孔底形成圓點狀沉淀物為陰性反應。另外,亦可用已知抗原致敏紅細胞制成診斷液檢測相應抗體,此即正向間接血凝試驗。

間接血凝試驗是一項準確而敏感的血清反應,在敏感性方面表現得尤為突出,如可檢出每ml含100萬個鼠疫桿菌、野兔熱桿菌或類鼻疽桿菌,每ml含160萬個炭疽芽胞、2 500萬個布魯氏菌、5000萬個霍亂弧菌、0.04μg肉毒梭菌毒素等。不足的方面是由于紅細胞表面是一個復雜的有機結構,上面往往有許多抗原,可以和血清中的其他成分起反應,因而一定程度地影響試驗的特異性。

(二) 間接炭凝集試驗 即將已知的抗體球蛋白在一定溫度和pH值下吸附在細炭粉表面上,制成所謂的致敏炭粉診斷液,當與相應抗原在實施反應的玻板上相遇時,炭粉則被凝集,此時傾斜玻璃板觀察時,則看到好似無數個黑色帶閃光的細砂粒在液滴中滾動,即為陽性反應;如果液滴仍呈濃墨汁狀團集一起,則為陰性反應。

炭凝集反應的最大特點是,對標本的純度要求不甚嚴格,受雜質的干擾較小。不足的方面是敏感性稍差,只能檢出每毫升含2500萬個鼠疫桿菌、類鼻疽桿菌或馬流產沙門氏菌,和1億個布魯氏菌和霍亂弧菌的標本等。

(三) 間接乳膠凝集試驗 是利用直徑為0.6~0.7μm的聚苯乙烯乳膠(polystyrene)作載體,吸附抗體,制成致敏乳膠診斷液,檢測含相應抗原標本的一種間接凝集反應。它的原理和操作方法與上述的間接凝集試驗類似,只是采用人工合成的乳膠微球作載體,而不是天然的紅細胞或炭粉。在玻璃板上實施反應,當致敏乳膠與相應抗原相遇,如乳膠顆粒被凝集,則好似粉筆末飄浮在水中,為陽性反應;液滴仍呈乳狀均等混濁,則為陰性反應。

乳膠凝集反應的優點在于快速,數分鐘即可初報結果;操作簡便,無需特殊的儀器設備,在基層單位即可進行。所以近幾年來,國內外已逐漸用其對沙門氏菌、炭疽桿菌、流行性感冒桿菌、嗜肺軍團桿菌、腦膜炎雙球菌、肺炎球菌、葡萄球菌腸毒素(2×10-4μg/ml)和嗜鹽桿菌等作鑒定,以及對鉤端螺旋體患者血清抗體作檢測。不足的方面是,聚苯乙烯乳膠的性質較脆弱,易受反應環境中存在的雜質的干擾,發生非特異性自家凝集,出現假陽性反應。


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