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ELISA標本處理不當直接影響實驗操作

來源:上海滬鼎生物科技有限公司   2023年06月21日 15:21  

一、標本的影響

   溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化

酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以wan全洗脫,它可使H2O2釋放出原生態氧(O),從而催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質,即顯藍色,產生假陽性。所以嚴重溶血標本禁用。

 

二、標本受細菌污染

   因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產

生非特異性顯色而干擾測定結果。

 

三、標本保存不當

   在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性;為克服上述

干擾,elisa試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5 d內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時應輕柔,不可強烈振蕩。

   塑料試管能吸附抗原物質,樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。

   使用真空采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,EDTA、酶抑制劑可抑制

ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。

 

四、標本凝固不全

   在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血

清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。


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