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生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin檢測(cè)范圍多少?

來(lái)源:上海軒澤康生物有限公司   2022年08月19日 16:31  

本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本人生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelinGHRP-Ghrelin含量

有效期:6個(gè)月

保存條件:2-8

上海軒澤康生物有限公司提供

試劑盒組成:

名稱(chēng)

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12×8

12×4

無(wú)

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL*6

0.3mL*6

無(wú)

生物素標(biāo)記抗體

6mL

3mL

無(wú)

樣本稀釋液

6mL

3mL

無(wú)

檢測(cè)抗體-HRP

10mL

5mL

無(wú)

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

無(wú)

底物B

6mL

3mL

無(wú)

終止液

6mL

3mL

無(wú)

封板膜

2

2

無(wú)

說(shuō)明書(shū)

1

1

無(wú)

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

無(wú)


1. 96T/48T)打開(kāi)包裝后請(qǐng)及時(shí)檢查所有物品是否齊全。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:16008004002001000 pg/mL

3. 經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

檢測(cè)前準(zhǔn)備工作:

1. 請(qǐng)?zhí)崆?/span>20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象;放置室溫,輕搖均勻,待結(jié)晶*溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液,未用完的放回4

3. 2洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按120稀釋?zhuān)?/span>120×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。


實(shí)驗(yàn)原理:

試劑盒采用雙抗體步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)捕獲抗體包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品孵育,加入生物化抗體進(jìn)行抗體生物素化,經(jīng)過(guò)溫育并*后加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelinGHRP-Ghrelin呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度

實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材:

1. 酶標(biāo)儀(450nm

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

3. 37恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水


樣本處理及要求:

1. 血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 血漿:EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-81000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mLPBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清:請(qǐng)1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

5. 其它生物標(biāo)本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè)。

6. 樣品外觀(guān):樣品應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。

7. 樣品保存:樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃,若不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),避免反復(fù)凍融,標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

注意事項(xiàng):

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。


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