艾德萊教學:確認RNA的質(zhì)量好壞,必須跑電泳
手把手教學:確認RNA的質(zhì)量好壞,必須跑電泳(之一)。只有結(jié)合RNA電泳+OD值和OD比值才能判斷。如果不跑電泳,只測OD值和比值是無法確定RNA的質(zhì)量好壞的。因為,機器測OD吸光值值測的不僅僅是來源于RNA的吸光值,也包括殘留雜質(zhì)、殘留蛋白、殘留DNA的吸光值,甚至降解的RNA還會導致OD值升高(這叫核酸的增色效應)。這些吸光值都會導致OD測量值的虛高。造成誤認為RNA濃度高,其實卻是殘留了蛋白,DNA,雜質(zhì),和/或者降解的RNA。下面舉一例:已經(jīng)*降解的RNA,OD測量值和比值卻基本正常,還顯示濃度高(實際是降解的RNA因為核酸增色效應導致吸光值升高,從而造成濃度的虛高),不跑電泳,*沒法知道這個RNA已經(jīng)降解了,不能用了。
手把手教學:確認RNA的質(zhì)量好壞,必須跑電泳(之二)。只有結(jié)合RNA電泳+OD值和OD比值才能判斷。如果不跑電泳,只測OD值和比值是無法確定RNA的質(zhì)量好壞的。因為,機器測OD吸光值值測的不僅僅是來源于RNA的吸光值,也包括殘留雜質(zhì)、殘留蛋白、殘留DNA的吸光值,甚至降解的RNA還會導致OD值升高(這叫核酸的增色效應)。這些吸光值都會導致OD測量值的虛高。造成誤認為RNA濃度高,其實卻是殘留了蛋白,DNA,雜質(zhì),和/或者降解的RNA。下面再舉一例:已經(jīng)電泳*降解的RNA,OD測量值和比值卻基本正常,還顯示濃度高(實際是降解的RNA因為核酸增色效應導致吸光值升高,從而造成濃度的虛高),不跑電泳,*沒法知道這個RNA已經(jīng)降解了,不能用了。
手把手教學:確認RNA的質(zhì)量好壞,必須跑電泳(之三)。只有結(jié)合RNA電泳+OD值和OD比值才能判斷。如果不跑電泳,只測OD值和比值是無法確定RNA的質(zhì)量好壞的。因為,機器測OD吸光值測的不僅僅是來源于RNA的吸光值,也包括殘留雜質(zhì)、殘留蛋白、殘留DNA的吸光值,甚至降解的RNA還會導致OD值升高(這叫核酸的增色效應)。這些吸光值都會導致OD測量值的虛高。造成誤認為RNA濃度高,其實卻是殘留了蛋白,DNA,雜質(zhì),和/或者降解的RNA。下面再舉一例:Trizol提取玉米胚乳RNA,提取的RNA含有大量雜質(zhì)的RNA/并且有部分降解的RNA,OD測量值和比值卻和我們試劑盒提取基本相同,但是跑電泳,發(fā)現(xiàn)實際濃度亮度不到我們試劑盒提取的一半,說明測量吸光值的一半以上來源于雜質(zhì)的吸光值,或者降解的小片段RNA的吸光值。做下游熒光定量檢測,Trizol提取的玉米胚乳RNA,含有大量雜質(zhì)和降解RNA,CT值比試劑盒提取的晚了4-6個CT值。不跑電泳,他們的OD值和比值卻基本一致,只測OD值根本發(fā)現(xiàn)不了。
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