?ELISA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要注意什么
1.樣本處理
首先對(duì)于ELISA來(lái)說(shuō),正確的處理樣本是保證檢測(cè)準(zhǔn)確性和正確性的第一步。
正式實(shí)驗(yàn)之前最好使用少量的樣本進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),可以選擇2、5、10倍稀釋樣本,選擇合適的稀釋比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn),親身經(jīng)歷告訴大家,千萬(wàn)不能圖省事,不然濃度太大超過(guò)檢測(cè)限,簡(jiǎn)直就是賠了夫人又折兵!!!同時(shí),樣本的保存也非常重要,保存不當(dāng)或在冰箱里保存過(guò)久的樣本,血清中l(wèi)gG可聚合成多聚體,導(dǎo)致結(jié)果偏高。建議五天內(nèi)檢測(cè)的血清樣本可短暫存放4℃,一周之后測(cè)定的血清樣本應(yīng)該低溫凍存,同時(shí)切忌反復(fù)凍融。如果是血清樣本,也要主要樣本不能有溶血、脂血和細(xì)菌等殘留,這些樣本中存在非特異性顯色影響結(jié)果。 2.標(biāo)準(zhǔn)品如何使用
標(biāo)準(zhǔn)品的配置一般都是按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行的倍比稀釋,很多廠家提供的盒子里標(biāo)準(zhǔn)品是凍干粉,同時(shí)要求每次使用新的凍干標(biāo)準(zhǔn)品,那重復(fù)使用是否會(huì)有影響呢?這里我又很有經(jīng)歷的含淚告訴大家,咨詢過(guò)國(guó)產(chǎn)D牌的技術(shù)支持,建議是如果非用不可,那么標(biāo)準(zhǔn)品打開(kāi)后一定要注意保存,且盡量不要相隔太久。我也曾經(jīng)試過(guò),冬天放置一周的標(biāo)準(zhǔn)品,再次使用差別不大,但是放太久的標(biāo)準(zhǔn)品建議狠心丟掉,不要使用。因此小伙伴們?cè)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)一定要充分,盡量備好樣本再進(jìn)行操作! 3.操作過(guò)程需牢記
首先,實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前要先將試劑盒從冰箱中恢復(fù)室溫。
加樣時(shí)盡量將液體加入孔底,不要有氣泡,提供一個(gè)小tip!因?yàn)橛袣馀輹?huì)影響吸光度值的測(cè)定,檢測(cè)之前可以使用小槍頭很容易戳破氣泡。
洗板時(shí)注意不要間隔太久,盡量避免干板現(xiàn)象!
按照試劑盒批號(hào)和保質(zhì)期使用,不同批次的試劑嚴(yán)禁混合使用,同時(shí)試劑盒使用后剩余的孔板一定要和干燥劑一起保存,防止潮濕。
目的蛋白含量低的樣本可以咨詢廠家是否可以適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間,使其充分結(jié)合。(本人使用不同廠家的試劑盒要求是不同的,有需要嚴(yán)格按照說(shuō)明時(shí)間進(jìn)行,防止非特異性結(jié)合,因此小伙伴們還是要多咨詢一下!)
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