1.樣本處理
首先對于ELISA來說,正確的處理樣本是保證檢測準(zhǔn)確性和正確性的第一步。
正式實驗之前最好使用少量的樣本進行預(yù)實驗,可以選擇2、5、10倍稀釋樣本,選擇合適的稀釋比例進行實驗,親身經(jīng)歷告訴大家,千萬不能圖省事,不然濃度太大超過檢測限,簡直就是賠了夫人又折兵!!!同時,樣本的保存也非常重要,保存不當(dāng)或在冰箱里保存過久的樣本,血清中l(wèi)gG可聚合成多聚體,導(dǎo)致結(jié)果偏高。建議五天內(nèi)檢測的血清樣本可短暫存放4℃,一周之后測定的血清樣本應(yīng)該低溫凍存,同時切忌反復(fù)凍融。如果是血清樣本,也要主要樣本不能有溶血、脂血和細(xì)菌等殘留,這些樣本中存在非特異性顯色影響結(jié)果。 2.標(biāo)準(zhǔn)品如何使用
標(biāo)準(zhǔn)品的配置一般都是按照說明書進行的倍比稀釋,很多廠家提供的盒子里標(biāo)準(zhǔn)品是凍干粉,同時要求每次使用新的凍干標(biāo)準(zhǔn)品,那重復(fù)使用是否會有影響呢?這里我又很有經(jīng)歷的含淚告訴大家,咨詢過國產(chǎn)D牌的技術(shù)支持,建議是如果非用不可,那么標(biāo)準(zhǔn)品打開后一定要注意保存,且盡量不要相隔太久。我也曾經(jīng)試過,冬天放置一周的標(biāo)準(zhǔn)品,再次使用差別不大,但是放太久的標(biāo)準(zhǔn)品建議狠心丟掉,不要使用。因此小伙伴們設(shè)計實驗一定要充分,盡量備好樣本再進行操作! 3.操作過程需牢記
首先,實驗進行前要先將試劑盒從冰箱中恢復(fù)室溫。
加樣時盡量將液體加入孔底,不要有氣泡,提供一個小tip!因為有氣泡會影響吸光度值的測定,檢測之前可以使用小槍頭很容易戳破氣泡。
洗板時注意不要間隔太久,盡量避免干板現(xiàn)象!
按照試劑盒批號和保質(zhì)期使用,不同批次的試劑嚴(yán)禁混合使用,同時試劑盒使用后剩余的孔板一定要和干燥劑一起保存,防止潮濕。
目的蛋白含量低的樣本可以咨詢廠家是否可以適當(dāng)延長孵育時間,使其充分結(jié)合。(本人使用不同廠家的試劑盒要求是不同的,有需要嚴(yán)格按照說明時間進行,防止非特異性結(jié)合,因此小伙伴們還是要多咨詢一下!)
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