一、3D基質膠細胞系細胞培養套裝（不含酚紅）產品說明

1、貨號：B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

2、規格：2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

3、儲存條件：常溫運輸，4℃保存，可保存兩年

二、3D基質膠細胞系細胞培養套裝（不含酚紅）產品特點

1、植物源材料，無任何動物成分；

2、胺基酸序列人源化 ；

3、可調控基質膠硬度進行多種細胞培養；

4、3D細胞/類器官培養種類數量范圍更廣；

5、無人畜共通病原菌或毒素風險；

6、最為適用于醫療級生物原料；

7、高活性、高純度、可融化；

8、4度運輸、4度保存；

9、2年保存時間；

10、3D培養結束后基質膠可以溫和融化，并保留3D細胞/類器官結構完整性。

三、應用

•三維細胞球體培養試驗

•適合用于三維細胞藥物篩檢平臺

四、樣本類型

•腫瘤細胞系

五、試劑盒組分

六、使用步驟：

A.試劑制備

A基質膠：將A基質膠溶于37℃水浴槽回溫10分鐘， 確認*融解.

C緩沖溶液(1X)制備：使用前將10X C緩沖溶液用冰的無細胞培養液(例如： 無血清DMEM、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .

D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.

B.Biozellen®3D細胞培養基質膠的制備

全部步驟需要在無菌環境內操作，操作步驟如下：

1. 將24孔培養板放置于冰上預冷。

2. 細胞計數后取 2×105~2×107 細胞與 0.5 毫升 37℃ 培養基均勻混合，并與0.5毫升37℃ A膠按照 1:1 等比例均勻混合，最終細胞密度105~107cells/mL。

注：請選擇適當的培養溶液與條件進行試驗，貼壁細胞應在~80% 匯合度下培養。

3.取 20-40 微升步驟 2 含細胞的混合 A 膠溶液滴于 步驟 1 預冷的培養板上，膠體將于 5 分鐘內成膠。 注: 測試膠體是否成膠，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進行確認。

4.待膠體成膠后，添加1毫升冰的1X C緩沖溶液，并蓋過步驟3 的膠溶液，固定 15 分鐘。

5.待15分鐘固定后，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細胞生長之培養基溶液。

6將含有細胞的膠于37°C 二氧化碳培養箱內進行7~14天的培養，并觀察細胞球體的形成，按正常培養基更換頻率進行更換操作。

C、溶膠與收集細胞球體準備程序

小心的將培養基吸取移除，并用1X PBS進行清洗。

小心的將 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的D緩沖溶液，蓋過膠滴于室溫反應 5分鐘。

溫和的用1毫升移液管吸取，直到膠滴*溶解。

將含有細胞球體的溶液吸入1.5 毫升離心管，用1000 rpm的轉速離心10分鐘，移除上清液體并收集細胞球體做分析。

D、收集單顆細胞準備程序

在分離單細胞前，先按上述溶膠與收集細胞球體準備程序進行操作

1. 添加trypsin-EDTA并與收集的細胞球體于37°C混合反應。

2. 用1毫升移液管混合，直到細胞體*分解。

3. 待細胞球體*分解，加入3倍體積的1X PBS，并用1000轉的轉速進行離心10分鐘，并移除上清液體收集沉淀的單細胞做分析。