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化學多肽修飾:PEG修飾多肽,多肽的熒光標記

來源:重慶渝偲醫(yī)藥科技有限公司   2022年04月08日 16:14  
多肽修飾主要是肽鏈主鏈結構和側鏈基團的修飾。通過修飾能夠改變肽類化合物的物理化學性質(zhì),優(yōu)化其在體內(nèi)的有效利用。經(jīng)過修飾的多肽類藥物,能夠顯著降低免疫原性、減少毒負作用、增加水溶性、延長體內(nèi)作用時間、改變體內(nèi)分布狀況等等。目前多肽標記及修飾的內(nèi)容非常多,廣泛應用在多肽藥物,多肽生物學,多肽抗體以及多肽試劑的研究中。目前應用廣泛的有:非放射性核素標記(C13,H2),熒光標記(FAM,F(xiàn)ITC),生物素標記,磷酸化修飾等。
熒光標記由于沒有放射性,實驗操作簡單。因此,目前在生物學研究中熒光標記應用非常廣泛,熒光標記方法與熒光試劑的結構有關系,對于有游離羧基的采用的方法與接肽反應相同,也采用HBTU/HOBt/DIEA方法連接。但是對于FITC標記,需要在連接FITC前,增加一個氨基己酸,避免在切割的過程中被TFA切割掉。
如何選擇合適的熒光標記基團取決于您的實驗需求。
藥理學實驗研究基本分為體內(nèi)研究和體外研究兩大類。
對于體內(nèi)研究,一般選擇發(fā)射波長在650-900nm的熒光基團,例如:ICG、Cy5.5和 Nile Blue。這是因為這類基團所發(fā)出的熒光具有較好的組織穿透能力,受背景干擾較小(水、血紅蛋白和脫氧血紅蛋白一般都會產(chǎn)生背景干擾吸收,其區(qū)域在560nm左右)。
對于體外研究,發(fā)射波長在400到600nm的熒光基團最為常用,例如:AMC、FITC和TAMRA。
熒光標記的多肽在現(xiàn)代醫(yī)學中的應用是很廣泛的。例如:用Cy5.5標記的目標多肽研究對 c-Met受體的綁定作用。有人設計含有KSLSRHDHIHHH序列的cMBP,其C端為GGGSC, C端Cys用 Cy5.5-Maleimide標記其巰基側鏈。研究結果表明:上述Cy5.5-cMBP多肽與U87MG腫瘤細胞共孵24小時后,具有較高的癌細胞攝取值,其響應濃度在納摩爾級別。多肽保存
為了防止或盡量減少多肽降解,請將多肽以凍干粉形式保存在-20°C,-80°C更佳。如果需要保存溶液肽,最好分成小樣存放,以避免反復凍融。一份樣品融凍后未用完,應扔掉。細菌降解有時會成為溶液肽的麻煩,所以請將肽溶于無菌水或肽溶液過濾除菌。
多肽保存方法建議
所有的凍干多肽產(chǎn)品可以在常溫下避光運輸,并可以在室溫條件下保存幾天或者少于一個星期,多肽性狀是穩(wěn)定的。所有的凍干多肽產(chǎn)品,都必須保存在干燥低溫的條件下,以-20℃的低溫為佳,若有條件最好保存在-80℃以下,在這樣的條件下大多數(shù)多肽可存放1-2年。
當需要使用多肽產(chǎn)品時,應在開蓋之前將多肽產(chǎn)品升至室溫;對保存于-20℃的產(chǎn)品,該過程需要1h或更長,因包裝大小而異。否則,當打開瓶蓋時,水氣進入會導致多肽凝縮而降低其穩(wěn)定性。一旦打開,應迅速稱量完畢,并立即密閉以免潮解,親水肽尤其應注意。
對序列中含有Cys、Met、Try的易氧化多肽和含有Gln、Asn、Asp的易降解多肽,應避免反復融凍,以免多肽被氧化和降解,因此建議分裝成小包裝保存。需要多少解凍多少,用后棄去,不要保存。
對于暫時不用的多肽,不要以溶液的形式保存(即使在-80°C的條件下)。


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