超級核酸酶(全能核酸酶,Benzonase Nuclease)使用指南
一、產品簡介
超級核酸酶CRGase是一種來源于粘質沙雷氏菌(Serratia marcescens,也稱靈桿菌)的非特異性核酸內切酶,也稱全能核酸酶或廣譜核酸酶。該核酸酶可在非常寬泛的條件下降解單鏈、雙鏈、線狀、環狀、天然或變性等各種形式的DNA或RNA,產生長度為3至5個堿基的5'-單磷酸寡核苷酸。
本產品用途廣泛,可用于在重組蛋白、病毒疫苗、抗體藥物等生物制品生產過程中去除核酸,或用于降低細胞、組織、微生物等蛋白裂解液樣品的粘度等(可以用于化學破菌而省去超聲儀或高壓均質機,或者結合化學破菌大幅度減少超聲儀或高壓均質機的工作負荷)。
本產品采用我公司自主研發的技術平臺表達、純化和制備,分子量約為52.3kDa。本產品活性部分與Serratia marcescens中的天然核酸內切酶氨基酸序列*一致。
二、產品性質
來源 | E. coli |
分子量 | 52.3 kDa |
純度 | 不小于 95% ( SDS-PAGE ) |
等電點 | 6.19 |
酶活 | 不小于 200 U/μL |
最適酶活 pH | 8.0-9.2 (工作范圍 pH 6.0-10.0 ) |
最適酶活溫度 | 37℃ (工作范圍 0℃-42℃ ) |
最適輔助因子 | 2mM Mg2+ (工作范圍 1-10 mM ) |
蛋白酶活性殘留 | 未檢出 |
保存緩沖液 | 10mM Tris (pH8.0), 500mM NaCl, 2mM MgCl2, 50% 甘油 |
活性單位定義 | 在 37℃ , pH 8.0 反應條件下,在 30 min 內*消化 37 μg DNA 成為寡核苷酸的酶量(相當于使 △A260 吸收值變化 1.0 )定義為一個活性單( U )。 |
三、產品用途
1)有效去除各種重組蛋白制備過程中的核酸殘留;
2)有效去除病毒疫苗和各種重組病毒中的核酸,以符合國家食藥監局相關指南中關于核酸污染的要求;
3)有效降低細胞裂解液由于大量核酸存在而導致的粘度過大,以使裂解液易于后續操作;
4)有效降低大腸桿菌或其它工程菌裂解液粘度,大幅改善蛋白制備過程中菌體裂解液難過濾、難離心的問題,節約設備和人力成本;
5)在某些情況下,充分去除核酸可以提高包涵體蛋白的復性率;
6)在實時定量PCR測定重組病毒滴度時,用于去除病毒包裝細胞的核酸和包裝質粒污染;
7)有效防止細胞成團,在細胞培養液中或某些細胞凍存液中加入適量超級核酸酶,可以防止細胞成團,以利于后續細胞分析和檢測。超級核酸酶沒有蛋白酶的活性殘留,本身也不會對健康細胞造成傷害,因此是防止細胞成團的理想選擇。
8)在二維凝膠電泳(2-DE)的過程中,加入核酸酶可以提高蛋白質的分離效率和雙向電泳的分辨率。
四、產品效果
五、運輸和保存方法
低溫運輸(冰袋或干冰),-20℃保存,有效期3年。4℃保存一個月,酶活性沒有明顯變化。
六、常見化學試劑兼容條件
化學試劑 | 最佳條件 | 有效條件 |
DTT | 0-100 mM | 可以大于 100 mM |
2-Mercaptoethanol | 0-100mM | 可以大于 100mM |
Triton X-100 | -- | 小于 0.4% |
Urea | -- | 小于 5M |
SDS | -- | 小于 0.05% |
磷酸根離子 | 0-10 mM | 0-100 mM |
單價陽離子(如 Na + , K+ , NH4 + ) | 0-20 mM | 0-150 mM |
(NH4)2SO4 | -- | 小于 100mM |
七、使用方法示例(去除細胞裂解上清中的核酸)
1、樣本準備
大腸桿菌:離心收集菌體,用PBS或其它緩沖液清洗1次,8,000 rpm離心5 min,收集菌體沉淀。
貼壁細胞:去除培養基,用PBS清洗細胞,去除上清。
懸浮細胞:離心收集細胞,用PBS清洗細胞,6,000 rpm離心10 min,收集細胞沉淀。
2、樣品處理
將收集到的菌體或細胞沉淀按照質量(g)與體積(mL)比1:(10~20) 的比例進行裂解處理,可以在冰上或室溫通過機械或化學方法裂解細胞。
3、酶的添加
按照250 Units消化1 g細胞沉淀的比例添加超級核酸酶,也可以先進行預實驗自行選擇添加的酶量,在一定范圍內增加酶量,消化所需時間相應減少。
4、上清獲取
以12,000 rpm的轉速高速離心10-30min,去除沉淀,即獲得菌體或細胞裂解液上清,再進行后續相關實驗。
八、注意事項
1)若溶液為高鹽溶液,偏酸性或者偏堿性,含有較高濃度的去垢劑、變性劑,應適當增加酶的用量或延長孵育時間。盡量按照上表“常見化學試劑兼容條件”表中的濃度范圍調整待處理樣品相關試劑的濃度,以使酶活性處于最大。
2)不建議-80oC保存本產品,也不建議反復凍融,有可能會降低產品的酶活性,可以適當分裝保存于-20oC。
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