Seahorse XF 細(xì)胞線粒體壓力測試

 全面了解線粒體功能

1、實驗背景

 安捷倫 SeahorseXF 細(xì)胞線粒體壓力測試通過在 Seahorse XFe 和 XF 細(xì)胞外流量分析儀上直接測量細(xì)胞的氧消耗速率（OCR）來表征線粒體功能的關(guān)鍵參數(shù)。它是基于培養(yǎng)板的活細(xì)胞實驗，能夠?qū)崟r監(jiān)測 OCR。   

   實驗使用 XF 傳感器探針板內(nèi)置的加藥孔在實驗過中將呼吸作用的調(diào)節(jié)劑加入細(xì)胞孔中，從而得到反映線粒體功能的關(guān)鍵參數(shù)。實驗試劑盒里的調(diào)節(jié)劑為寡霉素（Oligomycin），羰基氰-4（三氟甲氧基）苯腙（Carbonyl cyanide-4 (trifluoromethoxy)Phenylhydrazone，FCCP），魚藤酮（Rotenone）和（Antimycin A）。

圖1  安捷倫SeahorseXF細(xì)胞線粒體壓力測試曲線，展示線粒體功能的關(guān)鍵參數(shù)

圖 2  安捷倫 SeahorseXF 細(xì)胞線粒體壓力測試 ETC 的調(diào)節(jié)劑，闡述電子傳遞鏈（ETC）復(fù)合物，并顯示 Seahorse XF細(xì)胞線粒體壓力測試試劑盒包含的所有調(diào)節(jié)劑的作用靶點。

寡霉素抑制 ATP 合酶（復(fù)合物 V），是實驗中在基礎(chǔ)測量之后第一次注射的化合物。它影響或減少通過 ETC 的電子流，導(dǎo)致線粒體呼吸或 OCR  減少。減少的 OCR 與細(xì)胞 ATP 的產(chǎn)生相關(guān)。

羰基氰-4(三氟甲氧基)苯腙（FCCP）是一個解偶聯(lián)劑，它破壞質(zhì)子梯度和線粒體膜電位。它是寡霉素后第二次注射的化合物。加入的結(jié)果是，通過ETC的電子流不受限制，復(fù)合物IV耗氧量達(dá)到最大。FCCP激發(fā)的OCR可用來計算備用呼吸能力，它的定義是最大呼吸和基礎(chǔ)呼吸的差值。備用呼吸能力衡量細(xì)胞對增加的能量需求或壓力的反應(yīng)能力。

第三次注射的是復(fù)合物I的抑制劑魚藤酮和復(fù)合物III的抑制劑xxx的混合物。它們聯(lián)合關(guān)閉了線粒體呼吸，從而能夠計算由線粒體外的過程驅(qū)動的非線粒體呼吸。