蛋白修飾位點(diǎn)分析實(shí)驗(yàn)原理

先通過(guò)IP得到目的蛋白，再通過(guò)SDS-PAGE對(duì)目的蛋白進(jìn)行分離純化，將膠條上目的蛋白對(duì)應(yīng)的條帶切下進(jìn)行膠內(nèi)酶解和高靈敏度的液質(zhì)聯(lián)用分析(LC-MS/MS)，通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索得到蛋白上的修飾位點(diǎn)。

蛋白分析的應(yīng)用

1. 磷酸化：信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期、生長(zhǎng)發(fā)育及癌癥機(jī)理等；

2.糖基化：蛋白質(zhì)折疊、更新以及免疫應(yīng)答等；

3.乙酰化：基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性病變等；

4.泛素化：細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復(fù)以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等；

5.甲基化：染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等；

6.丙酰化 / 丙二酰化 / 戊二酰化 / 琥珀酰化：主要存在于線粒體和細(xì)菌中，與代謝過(guò)程密切相關(guān)。

實(shí)驗(yàn)流程

1.IP溶液/膠條；

2.蛋白酶消化；

3.LC-MS/MS分析；

4.搜庫(kù)后分析，蛋白鑒定、翻譯后修飾分析。

實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1. 周期：6周左右

2. 交付標(biāo)準(zhǔn)：質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)、白鑒定列表、肽段信息表、實(shí)驗(yàn)報(bào)告（主要儀器、試劑和實(shí)驗(yàn)方法）

需確認(rèn)的信息

1. 樣品：如果樣品為蛋白質(zhì)溶液，蛋白質(zhì)總量≥300mg; 如果是組織樣品，樣品總量≥0.1g； 如果是細(xì)胞樣品，細(xì)胞數(shù)量≥107個(gè)；如果是體液樣品，血清≥200ml，腦脊液≥200ml，尿液≥1ml，淚液≥1ml；

2. 樣品采集過(guò)程中使用到塑料制品時(shí)，盡量使用無(wú)色進(jìn)口產(chǎn)品，以減少塑料制品中雜質(zhì)對(duì)質(zhì)譜檢測(cè)的影響；

3. 確認(rèn)樣品所屬種屬、分析需求。