Qustions&解答Answers

Seahorse XF 實驗常見問題及解答

01可以使用超出保質(zhì)期的探針板或重復(fù)使用探針板嗎？

     Agilent 無法保證因使用超出保質(zhì)期的探針板或重復(fù)使用探針板而得到的實驗數(shù)據(jù)質(zhì)量(有效性)，為得到最佳的、最真實的數(shù)據(jù)，請使用有效期內(nèi)的探針板及其它消耗品。

02探針板水化超出水化時間怎么辦？

     Agilent建議將探針板放入37℃無CO2培養(yǎng)箱中水化過夜以得到*結(jié)果。最短水化時間是37℃水化12小時。探針板最長水化時間是37℃水化72小時，但由于液體蒸發(fā)需要補(bǔ)充(或更換)校準(zhǔn)液，因此37℃無CO2培養(yǎng)箱務(wù)必放置水盤保證濕度。

03Fluxpak各種探針板有什么區(qū)別？

     探針板是Fluxpak的組成部分，一個Fluxpak包含探針板、水化板、校準(zhǔn)液和細(xì)胞培養(yǎng)微孔板。以上各消耗品數(shù)量因所購Fluxpak類型而不同。探針板不能單獨訂購，必須通過訂購Fluxpak來購買，但細(xì)胞培養(yǎng)板和校準(zhǔn)液可單獨購買。訂購前，需要了解使用機(jī)器的型號及所需要的實驗次數(shù)，訂購與之配套的Fluxpak。

04計劃明天做實驗，我今天要做些啥？

     實驗前一天，打開主機(jī)，打開電腦，同時點開Wave軟件，確保是Connected的狀態(tài)，水化探針板，貼壁細(xì)胞提前接種到Seahorse的細(xì)胞培養(yǎng)板里。

05探針板水化聽說有二步，是這樣嗎？

     是的，96孔探針板，實驗前一天，用無菌水；第二天做實驗前，棄去無菌水，更換上37℃預(yù)熱好的校準(zhǔn)液，再放置無CO2恒溫箱孵育1小時，這樣二步法水化，避免了探針頭上的小氣泡；24機(jī)型探針板一步法水化即可，但是還是建議用之前手動排一下氣泡；

06一次實驗可以只使用探針板其中的一部分嗎？

     為了將所有藥物或化合物成功地注入細(xì)胞培養(yǎng)孔中，Agilent建議水化整個探針板并因需要將相同字母標(biāo)注的全部加藥孔注入藥物（請參考實驗流程中關(guān)于加載藥物的注意事項）。背景孔的加藥孔也必須加上藥物，保證所有的A加藥孔體積一致，B、C、D孔同理，否則會造成打藥失?。?/span>

07實驗中為何必須設(shè)置背景校正孔？

     背景校正孔被用來過濾掉實驗的干擾因素，比如溫度和 buffering capacity，這些干擾因素會影響氧含量和pH變化（非來源于代謝變化的影響）。背景校正孔還能被用來修正整板間溫度波動，來診斷潛在溫度問題，以及作為實驗獲得非期望數(shù)據(jù)時原因篩查的切入點。

08背景校正孔怎么設(shè)置？

      背景校正孔里除了沒有細(xì)胞，其它所有操作和細(xì)胞孔一致。96機(jī)型背景校正孔（A1,A12, H1, H12，即4個角）不接種細(xì)胞；24機(jī)型背景校正孔設(shè)置為（A1, B4, C3, D6）；確保背景校正孔中只加入培養(yǎng)液（無細(xì)胞）

09為何細(xì)胞培養(yǎng)板需要在 37℃無CO2 培養(yǎng)箱中放置45-60min？

     細(xì)胞培養(yǎng)板在37℃無CO2培養(yǎng)箱中孵育45-60min的目的是為了脫氣，釋放CO2。

10 Seahorse 實驗時，我擔(dān)心細(xì)胞量少，我多種點細(xì)胞可以嗎？

     細(xì)胞的密度需要摸索，在實驗上機(jī)前，長滿板底面積80-90%為最佳，設(shè)置一個密度梯度，找到最佳的密度；細(xì)胞過密會使檢測時形成的瞬間微室氧氣快速耗盡。

11 Seahorse 實驗，種細(xì)胞和平時種細(xì)胞有區(qū)別嗎？

      安捷倫細(xì)胞培養(yǎng)板種細(xì)胞時候，槍頭抵壁，與水平面呈45°角度加入，加完在超凈臺靜置1小時，有助于促進(jìn)細(xì)胞均勻分布并減少邊緣效應(yīng)。96孔細(xì)胞板種80ul；24機(jī)型的板子分二步，先每孔接種100 μL細(xì)胞懸液，培養(yǎng)細(xì)胞1-6小時，細(xì)胞貼壁后，再補(bǔ)充生長培養(yǎng)基，每孔加入150μL生長培養(yǎng)液,總體積為250 μL。加液時沿壁輕輕加入，避免吹起剛貼壁的細(xì)胞。 

12 使用組織黏附劑處理細(xì)胞培養(yǎng)板會影響XF實驗測量嗎？

     不會。使用諸如poly-L-Lysine，fibronectin，Gelatin，poly-D-lysine，Cell-Tak™等組織黏附劑處理細(xì)胞培養(yǎng)板時，不會影響XF儀器測量的效果及實驗參數(shù)分析。

13 XFp/XFe96細(xì)胞培養(yǎng)微孔板的每個細(xì)胞孔的最大體積及底面積是多少？

       275 µL；底面積是正常96孔板底面積的40%。

14 XFe24細(xì)胞培養(yǎng)微孔板的每個細(xì)胞孔的最大體積及底面積是多少？

      1000 µL；底面積和正常96孔板底面積一樣大小。

15 Seahorse XF檢測液中需要加入抗生素嗎？

      無需加入抗生素，因為大部分XF實驗在幾小時內(nèi)就結(jié)束了。