今天，我公司技能專員特意為我們預備十幾條ELISA試劑盒操作的要點細節，閱覽之后可以總結一下您在試驗中有哪些要點被忽略掉了。熱愛ELISA試驗的新手們需留意這些細節：

1.不管是試劑盒，仍是其它產品，在運用之前我們都要仔細閱覽闡明書。

2.相同的，必定要確認試劑盒是不是在有效期內。

3.按闡明書確認一切試劑齊全(數量、體積)。

4.標本制備要規范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內無法試驗者，留意低溫保存。

5.ELISA試驗中為了確認信號和低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預試驗中進行互相相抗的滴定。一起，應包含在恰當規模內的規范品的系列稀釋。按試劑闡明書常規提供的規模進行操作。

6.規范品的制造：關于每種細胞因子應仔細閱覽闡明書，留意每批的細節。在運用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其間的細胞因子。根據每批闡明書中的細節，將凍干的細胞因子復溶。  

7.一般待測抗原規范曲線的線性規模的可通過將規范品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用規范的ELISA試劑盒操作流程、擴大試劑盒、第三類試劑、或改動酶底物體系可在必定規模內提高靈敏度。

8.根據檢測標本數量確認所需試劑的量。

9.按闡明書將所用試劑平衡至室溫，制造所需試劑，DIY夾心法ELISA常見技能攻略。

10.挑選抗體時挑選一個單抗和一個多抗進行配對；若挑選兩個單抗，有必要辨認不同表位的抗體；從同一家公司挑選抗體對。

11.為了優化靈敏度，建議過夜孵育規范品和標本。

12.若運用過氧化物酶作為顯色體系，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。

13.當測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。

14.預備好一切試驗額定所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等。

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