實驗方法原理:皂苷別稱堿皂體;皂素;皂甙;皂角苷;或皂草苷。皂苷是苷元為三萜或螺旋甾烷類化合物的一類糖苷,主要分布于陸地高等植物中,也少量存在于海星和海參等海洋生物中。 許多中草藥如人參、遠志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。有些皂苷還具有抗菌的活性或解熱、鎮靜、抗癌等有價值的生物活性。
1.檢品溶液的制備:
1)取皂角碎塊1g于大試管(或小燒杯)中,加蒸餾水15ml,于30~90°水浴上浸漬15分鐘后過濾,濾液供鑒別用。
2)取薯蕷碎塊0.5g加上法同樣制備得薯蕷水浸液。
3)取薯蕷碎塊0.5g于大試管或小錐形瓶中加95%乙醇10ml于水浴上溫浸15分鐘,濾液供鑒別。
2.鑒別試驗:
(1)溶血試驗:取濾紙片一小塊,于小心處滴加皂角浸液一滴,待干后于同處再滴加一滴,如是反復操作至滴加數滴,干燥后無噴霧血球試液(取牛血、羊血或兔血一份,用玻棒或棉簽攪和,除去凝集的血蛋白,加pH7.4磷酸鹽緩沖液一份稀釋即得),數分鐘后觀察在紅色的背底中是否出現無紅色的(或透明)斑點(中心處皂解浸液原點)。(本反應亦可在試管中進行,血球試液中草藥浸液中的皂苷溶解后,血球液由渾濁變為澄明。此外還可在載玻片上進行,并在顯微鏡下觀察血球破裂溶解前后的狀況)。
(2)泡沫試驗:薯蕷浸液,皂角浸液各2ml,分別置于試管中。用力振搖一分鐘后放置,在10分鐘內觀察二管是否都有持久性泡沫產生?
(3)醋酐濃硫酸試驗(Liebermann-Burchard反應),皂角浸液5ml,于蒸發皿中在水浴上蒸干,加入1ml醋酐使其溶解,滴于干燥比色盤中,從邊沿緩緩滴加濃硫酸1滴,觀察顏色變化。另取薯蕷浸液5ml,置于蒸發皿中,在水浴上蒸干,加入1ml醋酐溶液,并傾入比色盤中,(試管)沿管壁加入幾滴濃硫酸,觀察界面間是否有紫紅色環產生?
(4)氯-仿-濃硫酸試驗(Salkowski反應):取薯蕷醇浸液2ml,在水浴上蒸干,有氯-仿1ml溶解,轉入干燥小試管中,沿壁小心加濃硫酸1ml,氯-仿層顯紅或蘭色,硫酸層有綠色熒光,示含甾體皂苷。
注意事項:
采用比色法測定總皂苷含量時,標準品可以選擇兩種或兩種以上進行結果對比,取二者的平均值作為測定結果,使結果geng具有意義。測定回收率時,也可以選擇兩種或兩種以上標準品進行對比檢測。
其他:
試驗的操作采用比色法,并選擇酶標儀處理數據,操作簡便快捷,線性關系良好,并減少了用紫外分光光度計法操作時的大量時間,降低了時間對顯色結果的影響,穩定性、精-密度、重復性及回收率均達到標準要求
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