【背景資料】 見細胞說明書

MCF7/DDP人乳腺癌順鉑耐藥株|MCF7細胞培養步驟
【產品來源】 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外著名大學建系
"公司提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細胞特性，一般細胞培養PBS量是10%，如果出現細胞狀態不良情況，可以提高PBS量到15%，SHEE人永生化食管上皮細胞待細胞穩定后，調回PBS量10%，對于初次實驗者，一般細胞培養，都需要加入雙抗防止細胞污染，細胞匯合度達到90%，我們開始寄送，這樣可以保持細胞收到時，良好的細胞活力。

一、售前
         上海琛藝實業專業為國內科研提供高品質細胞和優質服務，QC檢測合格后發貨保證細胞狀態良好，發貨前保證質量。
 
二、售后
         收到細胞7天內出現狀態不佳等情況請及時反饋，會有技術同步指導操作協助解決，如仍未養活免費重發。建議及時保種，有備無患！
 
三、細胞生長條件：
培養條件   
GIBCO(培養基90% +10%FBS)
溫度                   
                    37℃
空氣條件  
5% CO2，,95% AIR
傳代方法
1:2傳代，2~3天換液
凍存條件
90%FBS+10%DMSO
 
四、細胞收到后處理
    細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿*培養液并封好瓶口是細胞運輸的好辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養液，懸浮細胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。
 MCF7/DDP人乳腺癌順鉑耐藥株|MCF7細胞培養步驟
培養步驟：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
 
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右*培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
 
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
 
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右*培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
 
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