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羥自由基清除能力測定試劑盒說明書

來源:青島捷世康生物科技有限公司   2020年10月30日 11:26  

分光法 50T/48S

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

 測定意義: 羥自由基作用于體內蛋白質、核酸、脂類等生物分子,造成細胞結構和功能受損,進而導致體內代謝紊亂 引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標之一,在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應用。

測定原理:

H2O2/ Fe2+ 通過 Fenton 反應產生羥自由基,水楊酸能有效捕捉產生的羥自由基并與其反應生成有色物質 2,3-二羥基苯甲酸,在 510nm 處有大吸收峰,加入具有清除能力的物質后,有色物質便會減少,從而可以根據吸光值的數值判斷樣品清除羥自由基的能力。

自備實驗用品:

恒溫水浴鍋、可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體 18 mL×1 瓶,4℃避光保存。

樣品的制備:

1. 組織:按照組織質量(g:蒸餾水體積(mL) 15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 蒸餾水)進行冰浴勻漿,然后 10000g4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2. 血清、果汁等液體樣品可直接測定。

3. 提取物(或者藥物)可配制成一定濃度,如 5 mg/mL

操作步驟:

1. 分光光度計預熱 30min,調節波長至 510nm,蒸餾水調零。

2.  EP 管中加入如下試劑

 

 注意:空白管和對照管只需測定一次。

計算公式:

羥自由基清除率 D% =A -A 測)÷A -A 空)×100%

A 對、A 空、A 測:對照管、空白管和測定管的吸光值。

注意事項:

為了比較不同樣品羥自由基清除能力,對于同一批樣品必須加入等量的樣品,血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積,提取物(或者藥物)配制成同樣濃度。

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