一、不同的ATCC細胞,喜歡的環境是不一樣的。
這個不僅僅是說培養基的不同,還有就是ATCC細胞生長的空間密度問題,有一些ATCC細胞是數量多一點比較好生長,生長狀態也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的ATCC細胞。譬如內皮ATCC細胞。而有一些是ATCC細胞是數量少一點ATCC細胞狀態會生長的比較好,譬如巨噬ATCC細胞和某些腫瘤ATCC細胞。
尤其是巨噬ATCC細胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時就應該留很少量的ATCC細胞,這樣ATCC細胞狀態會比較好。并且巨噬ATCC細胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,ATCC細胞形態基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結果是不好的。所以在養ATCC細胞的時候應該摸索該ATCC細胞喜歡的生長空間密度問題。
二、對于有些人總是會遇到養的ATCC細胞形態怎么都不好的問題。
這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁ATCC細胞,如果ATCC細胞形態不好,(或者ATCC細胞形態不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進行如下操作:
首先:倒掉舊的培養基,加入3ml新的培養基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養基,進行預吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬ATCC細胞我們只吹打,不消化的)
其次:把吹打下來的ATCC細胞懸液加入到新的培養瓶內,培養瓶事先加入培養基,放入培養箱內培養,按時間點觀察ATCC細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經有部分ATCC細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養基,加入3ml新培養基再輕輕洗一次。然后加入*培養基培養。后續觀察ATCC細胞生長情況以及形態。
如果一次效果還不理想,可重復多次。直到找到ATCC細胞形態。其中要注意,結合ATCC細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數量長得好的ATCC細胞你就等貼壁ATCC細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。
三、ATCC細胞關于培養瓶內加入培養基的量的問題。
這個是要靠自己去摸索你所養的ATCC細胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。有些ATCC細胞反而是培養基少一點相反ATCC細胞形態會長得比較好。(可能也是競爭很大,有優勝劣汰吧。)對于生長速度快的ATCC細胞,易生長的ATCC細胞加少一點培養基ATCC細胞形態會更好。但是要注意換液掌握。
四、關于選擇培養瓶的問題。
有時發現生長速度快的ATCC細胞在玻璃瓶內生長的狀態會比一次性塑料瓶相對好一些。而對于同一種ATCC細胞,在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內的生長狀態也比塑料瓶內好。
這可能是因為塑料瓶比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的ATCC細胞在塑料瓶這種相對“更安逸”的環境里反而長得狀態不如玻璃瓶好。
所以對于生長速度慢的ATCC細胞如果想要更漂亮的ATCC細胞狀態,塑料瓶比玻璃瓶會好,對于生長速度慢的ATCC細胞,玻璃瓶則會更好。同樣,對于同一種ATCC細胞,在其生長速度慢的時候,塑料瓶會好一點,比如剛剛復蘇的時候,或者原代培養的時候。而在其生長旺盛的時候,ATCC細胞玻璃瓶則相對會好一點。
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