U937-GFP人白血病綠色標記細胞 培養步驟 含STR鑒定

產品名：U937-Luciferase-GFP

物種：人組織細胞淋巴瘤細胞

保存體系：-80°C短期保存，液氮長期保存

培養條件：1640+10%FBS

生長類型：懸浮生長

運輸方式：新鮮細胞常溫運輸，凍存細胞干冰運輸

復蘇流程：細胞復蘇：

1.帶上防護面罩及防凍手套，從液氮罐中取出細胞，并迅速放入37°C水浴鍋中解凍。

2.細胞解凍后，通過傳遞倉將細胞傳遞至細胞房內。

3.在生物安全柜內，取出一只15mL無菌離心管，使用1mL移液器向15mL離心管內加入4mL 培養基。

4.使用75%的醫用消毒酒精棉球仔細擦拭上述在37°C水浴鍋中解凍的細胞凍存管外表面，進行表面消毒。在生物安全柜內，擰開細胞凍存管，然后用1mL移液器將管內的細胞懸液吸出，逐滴加入至上述準備的含有4mL培養基的15mL離心管中，將15mL離心管蓋子旋緊，緩慢上下顛倒4次，使細胞懸液混勻。

5.將含有細胞懸液的離心管置于離心機中，設置離心參數如下：200xg、室溫（~25°C）離心5分鐘。

6.離心結束后，將離心管輕輕轉移至生物安全柜中，此時細胞離心管底部可見白色細胞團。使用電動吸引器將培養基上清吸掉（細胞團比較松散，注意不要觸及底部的細胞團）。

7.使用1mL移液器加入2mL*培養基，輕輕吹打5次重懸細胞團，計數，接種。

8.將細胞放置培養箱中過夜培養。

圖示說明：左圖為NSG小鼠尾靜脈輸注靶細胞后第三天活體成像效果，右圖為第十一天活體成像效果。

圖示說明：流式檢測本品綠色熒光蛋白表達情況。

U937-GFP人白血病綠色標記細胞 培養步驟 含STR鑒定

   您需要準備好細胞所要用到的培養基和相關試劑，雖然所有的貼壁，半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多，但是不同的實驗室培養條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在，也會導致對細胞處理不當，或者環境的不適應而造成細胞的死亡。

       1.收到細胞，di一時間要鏡檢：觀察細胞形態是否正常，對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好，觀察細胞密度，有疑議及時咨提供細胞的技術人員。由于運輸的時間或者溫度的變化，很多貼壁細胞在盛滿培養基的瓶子里生長的狀態和平時會有點不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時貼壁就不是很牢，在裝滿的培養基瓶子里面，會發生大片的脫落，細胞聚集在一起，但是細胞生長還是正常的，通過離心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。

       2.當通過上一步的觀察，細胞初步沒有任何問題時，進行下一步操作。當收到的細胞密達到80%左右時，則處理如下：棄除瓶中大部分培養基，僅保留5到10mL培養所需的常規培養基；或更換新鮮的培養基，置于培養箱中，隨后每天觀察。細胞在低于正常生長溫度情況下，會調整為靜止期，或者慢速生長期，必須恢復37度的環境至少3個小時左右，才能重新調整到接近對數生長期的狀態，在對數生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率，和細胞的存活率。

       3.如果經di一步觀察發現細胞密度超過90%，并且細胞狀態很好時，則復溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應依據不同的細胞而定。對于生長比較快，狀態穩定，不易受外界影響的細胞可以一次多傳幾瓶；對于生長較慢，細胞比較薄，狀態容易波動的細胞類型，一次少傳些，保證每瓶細胞密度大些，便于穩定生長。至于一些比較陌生的細胞，di一次處理也可以依照第二種情況。
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2 g/L)中比在Hanks (0.35 g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。