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上海琛藝實業有限公司提供ATCC原代細胞，ATCC菌株代購，同時上海琛藝新增細胞庫，具有自己的研發細胞培養庫，上千株細胞具有STR鑒定，開春大放送，*，同時還有好禮相送，具體歡迎咨詢我們銷售人員。。。。

SW480-LUC人結腸癌熒光素酶標記細胞 培養步驟

【細胞傳代】：1:3 傳代

【細胞活力】：90％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

【細胞檢測】：細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

【細胞凍存】：液氮凍存（基礎培養基+10%DMSO+20%FBS）

【細胞運輸】：干冰運輸（1 Vial）或活細胞運輸（T-25 flasks）

詳細背景： 這株細胞的細胞骨架染色突出呈現肌動蛋白，在細胞質中有豐富的平行微絲。有報道稱在1uM血管緊張素II存在下，它們會收縮。細胞在軟瓊脂中形成克隆，SV40大T抗原陽性。

細胞來源： 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外著名大學建系

"購買細胞注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，OSKMZ-1小鼠誘導型多能干細胞| OSKMZ-1動物

顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養過夜，隔天再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。

4. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和公司技術部溝通交流。

規格： 復蘇T25培養瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

細胞規格： 1*10(5)/ml——1*10（6）/ml

SW480-LUC人結腸癌熒光素酶標記細胞 培養步驟

1. 為什么培養的細胞要及時傳代？
    答：體外培養的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續。
2.培養液pH下降很快可能原因有哪些？其解決辦法是什么？
    答：通常細胞生長得非常快時，pH值通常下降得很快。此時可以及時傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決。此外，培養瓶蓋擰得太緊、NaHCO3 緩沖系統緩沖能力不夠、培養液中鹽濃度不正確、細菌、酵母或真菌污染等也能導致pH值通常下降得很快。
       (1)按培養液中NaHCO3 濃度增加或減少培養箱內CO2 濃度，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3對應CO2濃度為5％到10％。
       (2)改用不依賴CO2培養液。
       (3)松開瓶蓋1/4 圈。加HEPES 緩沖液至10 到25mM終濃度。
       (4)在CO2 培養環境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks 鹽配制的培養液。
       (5)如果是污染造成的則丟棄培養物或用抗生素除菌。
3.培養液pH對細胞生長的影響？
    答：由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對細胞生長將產生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養用液時，需要注意一點：培新配的培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。
4.購買之細胞冷凍管經解凍后，為何會發生細胞數目太少之情形？
    答：研究人員在冷凍細胞之培養時出現細胞數目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應待細胞生長隔夜后再更換培養基即可。但對于DMSO敏感的細胞，還是復蘇細胞時，用離心去除DMSO比較好。
5.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？
    答：研究人員在細胞培養時出現存活率不佳，原因比較復雜，常見原因可歸納為：培養基使用錯誤或培養基品質不佳；血清使用錯誤或血清的品質不佳；解凍過程錯誤；冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心；懸浮細胞誤認為死細胞；培養溫度使用錯誤；細胞置于–80 ℃太久等。建議嚴格參照ATCC或ECACC的標準操作規程進行細胞復蘇、凍存等工作。
6.支原體污染會對細胞培養有何影響？
    答：支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數、代謝及研究之任一數據。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結果之數據方有意義。
7.冷凍保存細胞之方法？
    答：冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃(30－60 分鐘)→-20℃( 30 分鐘) → -80℃(16－18 小時或隔夜)→ 液氮罐長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80 ℃以下， 再放入液氮中長期儲存。注意：-20℃不可超過1 小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
 
8.懸浮細胞應如何繼代處理？
    答：一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養瓶中，稀釋細胞濃度即可。若培養液太多時可分瓶取出一部份含細胞之培養液至另一新的培養瓶中，加入新鮮培養基稀釋至適當濃度，重復前述步驟即可。
9.欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速？
    答：欲回收動物細胞，其離心速率一般為300×g (約1,000rpm)，5 - 10 分鐘，過高之轉速過長時間都將造成細胞死亡。合適的離心轉速是根據相對離心決定。 RCF=1.119×105×r×(rpm)2，其中 r為離心機轉軸中心與離心套管底部內壁的距離；rpm為離心機每分鐘的轉數；RCF為相對離心力，以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍數來表示表示單位。
10.培養細胞時應使用5%還是10%CO2，或者根本沒有影響？
    答：一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統， 而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3 含量為每公升3.7g時，細胞培養時應使用10% CO2；當培養基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應使用5%CO2培養細胞。
11.細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DMSO？
    答：除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞)，在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養方瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
12.冷凍管應如何解凍？
    答：取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1－2 分鐘內大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺操作細胞，用75％消毒凍存管，用新鮮培養基將細胞轉移至培養瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂

13.如何用臺盼蘭計數活細胞？

    答：將樣品適當稀釋后，用稀釋后的樣品和0.4％的臺盼蘭溶液按1:1混合后，用移液槍點樣到血球計數板，置于倒置顯微鏡下觀察、計數，其中藍色細胞是死細胞，因活細胞排斥臺盼蘭，不被染色。
14.細胞欲冷凍保存時，細胞冷凍管內應有多少細胞濃度？
    答：冷凍管內細胞數目一般為1-8×106 cells/ml vial。
15.細胞冷凍培養基之成份為何？
    答：動物細胞冷凍保存時zui常使用的冷凍培養基是含9 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原來細胞生長用之新鮮培養基均勻混合之。注意：由于DMSO 稀釋時會放出大量熱能，故不可將DMSO 直接加入細胞液中，必須使用前先行配制完成。
16.如何消除組織培養的污染？
    答：當重要的培養細胞污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。
1)在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞，稀釋到常規細胞傳代的濃度。