一、    細胞名稱 ：SGC-7901-LUC人胃癌熒光素酶標記細胞 培養步驟 含STR鑒定

二、    組織：SGC-7901-LUC人胃癌熒光素酶標記細胞 

三、    母細胞來源  ATCC

四、    轉染方法與標記過程的描述 慢病毒轉染G418篩選 

(一)     質粒部分

1.酶切載體：pGL3-SV40-luc使用NheⅠ和XBaⅠ內切酶37度過夜酶切，切下為1400bp的luc基因片斷；同時 plenti-neo使用speⅠ內切酶37度過夜單酶切。

2.電泳和膠回收：plenti-neo切開后加CIAP去磷酸化，37℃，30min；將片段luc和載體plenti-neo進行DNA電泳，再用TAKALA試劑盒膠回收，回收產物取少量電泳鑒定。

3.連接載體與目的片段:使用Invitrogen T4連接酶連接luc片段和plenti-neo線性化載體，連接使用20ul體系，25℃，10min。

4.轉化：感受態菌One Shot Stbl3在冰上融化后，加入連接產物，靜置25min后在水浴42℃，45sec熱休克，后加入250ul無抗培養基225轉搖菌1h，將轉化的菌鋪于有氨芐抗性平板37度過夜。

5.挑取單克隆：觀察平板后挑取15個單克隆至含2ml氨芐抗性 LB培養基搖菌管中，255轉搖菌6.5h。

6.小抽質粒與鑒定：使用堿裂解法小抽，質粒用25ul含RNA酶ddH2O溶解；酶切鑒定: 重組質粒用SpeⅠ內切酶37℃，2h單切，由于目的基因插入后speⅠ酶切位點發生融合，故不能切開者可鑒定為構建成功的質粒。

7.熒光素表達鑒定: 重組質粒plenti-neo-luc 轉染293T細胞：DNA定量后，使用PEI轉染plenti-neo-luc至24孔板已預鋪的293T細胞中。轉染采用脂質體法轉染，試劑采用JetPEI (Polyplus公司)。兩管EP管中分別加入50ul生理鹽水，其中一管加入1ug量的質粒plenti-neo-luc（DNA體積=1ug/DNA濃度），輕輕震蕩混勻，再輕微離心；在另一管中加入PEI 2ul輕輕震蕩混勻，輕微離心，然后把PEI管中的溶液加入含有的質粒管中，室溫孵育20min。將脂質體包繞DNA的混合液加入需要轉染的24孔內，37 ℃、5 % CO2條件下培養，8小時后換培養液。

8.報告基因檢測：Passive Lysis Agent裂解細胞，加入熒光素酶作用底物，將轉染質粒的細胞與陰性，陽性對照共同進行單報告基因檢測。

9.質粒中抽：取1ml轉染報告基因檢測正確的菌液加入100ml氨芐抗性的LB培養基中搖菌過夜，使用Invitrogen試劑盒中抽，產物電泳鑒定，－20℃保存。

(二)     慢病毒包裝部分

1. 質粒共轉染細胞：轉染前一天， 293T在10cm培養盤中的細胞達到90％，胰酶消化后，1：3傳入新10cm培養盤中。轉染時，細胞在培養盤中密度達到80％。采用脂質體PEI轉染法使編碼慢病毒包膜蛋白的質粒VSV G, Packaging Mix以及構建的plenti-neo-luc質粒15μg共轉染。6h后換新鮮DMEM培養基。

2．提取病毒上清：轉染48-72hours后，將含有病毒液的培養基轉移到15ml離心管中,在低溫4攝氏度條件下，3000rpm，離心10min去除片狀沉淀的細胞碎片。

3．濃縮病毒：將病毒上清用0.45um濾器過濾至濃縮離心管中，2000rpm，4℃，15min離心。濃縮液收集于500μl離心管中，-80℃保存。

SGC-7901-LUC人胃癌熒光素酶標記細胞 培養步驟

(三)     慢病毒感染&篩選

1.感染前一天(Day1)，消化Soas2細胞并計數，將細胞鋪于24孔板中（以便在感染前細胞達到30%-50%的匯合度，37°C過夜孵化細胞。

2.(Day2) 解凍低溫保存的慢病毒液，并且制備1：2病毒稀釋液200μl加入細胞中。

3.向每孔加入Polybrene達到終濃度6ug/ml，晃勻孔板，37度孵化過夜。

4.(Day3)移去含有慢病毒的培養基，加入500μl*培養基。

5.(Day4)換液，加入500μg/ml  G418來選擇穩定感染的細胞克隆。

6.(Day4－7），每24h換液，500μg/mlG418維持培養。

7.(Day8－12）細胞逐漸由24孔板傳入6孔板、6cm盤和10cm盤中500μg/mlG418維持培養。

8. Soas2-luc細胞系鑒定: 取5×104細胞，用Passive Lysis裂解液裂解，加入熒光素酶作用底物，將轉染質粒的細胞與陰性，陽性對照共同進行單報告基因檢測。

 
產品描述:
"SGC7901細胞：人低分化胃癌細胞
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
SGC7901 Cell
細胞形態特性：詳見細胞說明書
1161497-23-9
其實絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可，吸去胰酶后，殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細胞(絕大部分1min不到)。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞，連續這樣傳代，對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37度消化；什么算是消化好了呢？不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經可以了，很多人喜歡把細胞消化或者吹打成*分離細胞，這是沒有必要的。一般能移動了，說明細胞與培養基質材料的附著已經消失了，細胞之間的附著也已經消失了，細胞已經獨立分布了(雖然沒有呈現很廣的離散分布)。這個時候應該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細胞就是*成單個細胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養的細胞，尤其是腫瘤細胞的一個特性，無論死活的細胞都是如此，你可以嘗試，準備100%的單個細胞懸液，貼壁后觀察細胞，仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養細胞也是如此，容易聚集，不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液(不要笑，這個是初養懸浮細胞的人常犯的錯誤，以為懸浮培養就是一個一個分開)。細胞只要能從基質上脫離下來，這個時候即使是成片的(比如Calu-3細胞)，吹打不超過20次后(一般10次即可)，成小規模聚集(10個細胞左右)，是正常的，不要試圖再去延長消化時間，或者像有的同學那樣吹打1h，等待單細胞懸液出現。
SGC7901細胞：人低分化胃癌細胞
細胞生長特性：貼壁
MC-3T3-E1細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
NCI-H2405細胞系；細胞傳代方法：1：5-1：8傳代；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：混合生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
MDA-MB-231-luc細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁生長 ；細胞背景資料：MDA-MB-231來自患有轉移乳腺腺癌的51歲女病人的胸水。在裸鼠和ALS處理的BALB/c小鼠中，它能形成低分化腺癌（III級）。
GIST430細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
SKOV-3細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
解凍細胞常見實驗問題分析及推薦解決方法：在解凍凍存細胞時，發現會出現存活率低、大量細胞碎片及生長緩慢等問題，究竟是什么原因導致，我們該怎么進行解決？以下是國內外細胞培養專家針對解凍細胞實驗問題，總結的一些解決方案！出現低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：1)解凍過程中細胞裂解，推薦的解決方案：可預期到一定量的細胞死亡，因此細胞的濃度應足夠高，考慮到這一損失。起始濃度為1*10(6)至1*10(7)細胞/毫升；2)解凍過程中的問題，推薦的解決方案：在-70℃至-80℃下保存冷凍的培養物，保存時間為1-5天，但這不是保存的方法。在37℃充分解凍后應立即開始培養；3)對冷凍液過敏，推薦的解決方案：A.*或部分更換培養基，減少培養基中冷凍液的量。在24小時后更換培養液體可全部去除冷凍液。B.留出更多時間供培養物恢復。有時細胞需要幾周時間才能形成單層或密集的懸浮物，取決于冷凍時細胞的年齡或傳代次數或在生長階段中的位置。冷凍的*條件在對數期；4)被冷凍的原種細胞的年齡或冷凍時培養物的年齡，推薦的解決方案：解凍近冷凍的細胞。細胞處于冷凍狀態的時間越長，存活率越低。檢查冷凍細胞的時間和方法。在冷凍時細胞應處于對數期。
BMSC/hBMSCs細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：骨髓間充質干細胞
HCC 94[HCC941122]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
HPDE細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁生長 ；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
L78細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：肺腺
PC-2細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
MOPC細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：半貼壁；細胞背景資料：少突膠質前體細胞
SGC7901細胞：人低分化胃癌細胞
細胞產品包裝：復蘇形式：T25培養瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系
細胞傳代注意事項：①傳代培養時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次*只進行一種細胞的操作。每種細胞使用一套器材；②每天觀察細胞形態，掌握好細胞是否健康的標準：健康細胞的形態飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代；③如發現細胞有污染跡象，應立即采取措施，一般應棄置污染的細胞，如果必須挽救，可加含有抗生素的BBS或培養基反復清洗，隨后培養基中加入較大量的抗生素，并經常更換培養基。傳代細胞的建系和維持：細胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細胞種子凍存來實現。對每一個細胞系來說都有其自身的特點，要做好建系的維持必須記錄好細胞檔案,換液傳代和做好細胞系的管理工作。培養細胞的凍存及復蘇：細胞低溫凍存是培養室常規工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。
細胞背景資料：胃癌；女性
SGC7901細胞：人低分化胃癌細胞
細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
動物細胞實驗室*儀器進行簡單介紹：1)CO2培養箱：CO2培養箱是細胞培養的*儀器，它為細胞提供了一個體外培養的舒適環境，如適宜的溫度、濕度、酸堿度、O2濃度等。細胞在體外培養時很容易受到各種細菌、微生物的感染，因此，CO2培養箱的滅菌和抑菌能力就顯得尤為重要；2)烘箱(干燥箱)：用于細胞培養的一些器械、器皿必須烘干后才能使用，玻璃器皿等須干熱消毒。干熱消毒時，烘箱內溫度一般要達到160℃以上，通常使用鼓風式烘箱。其優點是溫度均勻、效果較好，缺點是升溫過程較慢。升溫時不能先升溫后鼓風而應鼓風與升溫同時開始，至100℃時，停止鼓風。需注意避免包裹器皿的紙或棉花燒焦，燒焦的碎屑可影響細胞的生長。消毒后不能立即打開箱門，以免驟冷導致玻璃器皿破裂，應等溫度自然下降至100℃以下后可開門。3)超凈工作臺/生物安全柜：細胞培養對無菌環境要求很高，在細胞操作時，一般需要在100級空氣質量條件下進行，因此超凈工作臺或生物安全柜就必須配備。4)液氮罐：為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般為液氮溫度-196℃，因此，需要液氮罐。在此環境中，一般細胞可以保存十年具有活性。5)超低溫冰箱：細胞的凍存過程需要一系列程序降溫，一般4℃下存放30min，轉放-20℃ 1 hour，再轉入-70至-80℃過夜，之后才可以轉移到液氮內(-196℃)，這時就必須配備一臺-86℃超低溫冰箱。一般超低溫冰箱保存細胞可達數月，對于不需要長期凍存的細胞，可暫時放于超低溫冰箱保存。6)恒溫水浴：從液氮或超低溫冰箱中取出細胞凍存管需要立即放于37℃水浴中快速復蘇之后才傳代培養，因此，恒溫水浴也是細胞實驗室*儀器。7離心機：細胞培養需要離心收集傳代細胞，所以需要配置低速的常溫離心機，對于后期細胞內容物的分離則需要高速冷凍離心機。除上述儀器外，移液器、高壓滅菌鍋、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡也是細胞培養的*儀器，發酵罐、轉瓶機等也常常見于細胞培養實驗室。
CCLP-1細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
MT2細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸浮；細胞背景資料：T淋巴細胞白血病
293FT細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態特性：圓形；細胞生長特性：懸浮生長；細胞背景資料：該細胞穩定表達SV40大T抗原，并且促進適病毒產物的產生。
HT1080細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態特性：上皮細胞樣；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：這株細胞含有活化的N-ras癌基因。
HL-7702細胞系；細胞傳代方法：消化3-5分鐘，1：2,3天內可長滿；細胞形態特性：上皮樣；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
A431細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
LTEP-P細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
SGC7901細胞：人低分化胃癌細胞
THC8307細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
RL-952細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
WI-38[WI38]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
HO8910PM細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：卵巢癌；女性
NCI-H211細胞系；細胞傳代方法：3-4天換液1次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸浮生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
SUP-M2細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
Neuro-2a[N2a,Neuro-2a]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
HuT78細胞系；細胞傳代方法：維持細胞濃度在0.5—8×105viablecells/ml之間；每周換液3次；細胞形態特性：淋巴母細胞樣；細胞生長特性：懸浮生長；細胞背景資料：該細胞可產生IL-2，TNF-α；表達IL-2受體。
NCI-H520[H520]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
Hs 695T細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：4傳代，2-3天換液1次；細胞形態特性：上皮細胞；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
LSC-1細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：肝星形細胞；自發永生；Wistar
BALB/3T3 clone A31細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：胚胎；成纖維；自發永生；雄性；BALB/c
MKN28細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
LU99A細胞系；細胞傳代方法：1：10傳代；細胞形態特性：成纖維細胞；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
PC-12細胞系；細胞傳代方法：消化3-5分鐘。1：2。3天內可長滿；細胞形態特性：多角形；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：該細胞系來自能移植的雄性大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤。這些細胞表達神經生長因子(NGF)受體。NGF可誘導產生神經表型。這些細胞不合成。
HMrSV5細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：腹膜間皮細胞
GNM細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
Hep 3B(Hep 3B2.1-7)細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：上皮細胞樣；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：Hep-3b細胞建系于1979年，源自一位患有肝癌的7歲黑人男童。該細胞產生甲胎蛋白（alpha-fetoprotein)、乙肝表面抗原（BHsAg) 、白蛋白、巨球蛋白、α- 抗胰蛋白酶（alphal-antitrypsin)、轉鐵蛋白、補體（C3)、C3活性載體，纖維原等，具有廣泛的研究價值。
BMSC/hBMSCs細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：骨髓間充質干細胞
8910PM細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
SW1463細胞系；細胞傳代方法：1：3—1：8傳代，每周換液1-2次；細胞形態特性：上皮細胞；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
LIEP-P細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻