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上海琛藝實業有限公司提供ATCC原代細胞，ATCC菌株代購，同時上海琛藝新增細胞庫，具有自己的研發細胞培養庫，上千株細胞具有STR鑒定，開春大放送，*，同時還有好禮相送，具體歡迎咨詢我們銷售人員。。。。

NCI-N87[N87]-LUC人胃癌熒光素酶標記細胞 培養步驟 含STR鑒定

【細胞傳代】：1:3 傳代

【細胞活力】：90％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

【細胞檢測】：細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

【細胞凍存】：液氮凍存（基礎培養基+10%DMSO+20%FBS）

【細胞運輸】：干冰運輸（1 Vial）或活細胞運輸（T-25 flasks）

詳細背景： 這株細胞的細胞骨架染色突出呈現肌動蛋白，在細胞質中有豐富的平行微絲。有報道稱在1uM血管緊張素II存在下，它們會收縮。細胞在軟瓊脂中形成克隆，SV40大T抗原陽性。

細胞來源： 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外著名大學建系

"購買細胞注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，OSKMZ-1小鼠誘導型多能干細胞| OSKMZ-1動物

顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養過夜，隔天再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。

4. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和公司技術部溝通交流。

規格： 復蘇T25培養瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

細胞規格： 1*10(5)/ml——1*10（6）/ml

?細胞名稱：  NCI-N87[N87]-LUC人胃癌熒光素酶標記細胞 培養步驟 含STR鑒定

?組織  小鼠乳腺癌細胞系

?母細胞來源  客戶

?轉染方法與標記過程的描述 慢病毒轉染Hygromycin篩選 

1.質粒部分

1.酶切載體：pGL4.10（luc2）由酶切獲得1400bp的luc2基因片斷；EGFP和mCherry片段由PCR擴增獲得700-800bp左右片段；pSin-hyg-T2A載體酶切線性化。

2.電泳和膠回收：上述酶切產物DNA電泳，TAKARA試劑盒膠回收，回收產物取少量電泳鑒定。

3.連接載體與目的片段:使用Invitrogen T4連接酶連接luc2、EGFP或mCherry片段和pSin-hyg-T2A線性化載體，連接使用20ul體系，25℃，10min。

4.轉化：感受態菌One Shot Stbl3在冰上融化后，加入連接產物，靜置25min后在水浴42℃，45sec熱休克，后加入250ul無抗培養基225轉搖菌1h，將轉化的菌鋪于有氨芐抗性平板37度過夜。

5.挑取單克隆：觀察平板后挑取15個單克隆至含2ml氨芐抗性 LB培養基搖菌管中，255轉搖菌6.5h。

6.小抽質粒與鑒定：使用堿裂解法小抽，質粒用25ul含RNA酶ddH2O溶解；酶切鑒定: 重組質粒用通過酶切鑒定。

7.熒光素表達鑒定: 重組質粒pSin-hyg-GFP/luc2（以下簡稱Gluc）或pSin-hyg-mCherry/luc2（以下簡稱Mluc） 轉染293T細胞：DNA定量后，使用PEI轉染Gluc或Mluc至24孔板已預鋪的293T細胞中。轉染采用脂質體法轉染，試劑采用JetPEI (Polyplus公司)。兩管EP管中分別加入50ul生理鹽水，其中一管加入1ug量的質粒（DNA體積=1ug/DNA濃度），輕輕震蕩混勻，再輕微離心；在另一管中加入PEI 2ul輕輕震蕩混勻，輕微離心，然后把PEI管中的溶液加入含有的質粒管中，室溫孵育20min。將脂質體包繞DNA的混合液加入需要轉染的24孔內，37 ℃、5 % CO2條件下培養，8小時后換培養液。

8.報告基因檢測：Passive Lysis Agent裂解細胞，加入熒光素酶作用底物，將轉染質粒的細胞與陰性，陽性對照共同進行單報告基因檢測。

9.質粒中抽：取1ml轉染報告基因檢測正確的菌液加入100ml氨芐抗性的LB培養基中搖菌過夜，使用Invitrogen試劑盒中抽，產物電泳鑒定，－20℃保存。

1.慢病毒包裝部分

1. 質粒共轉染細胞：轉染前一天，293T在10cm培養盤中的細胞達到90％，胰酶消化后，1：3傳入新10cm培養盤中。轉染時，細胞在培養盤中密度達到80％。采用脂質體PEI轉染法使編碼慢病毒包膜蛋白的質粒VSV G, Packaging Mix以及構建的Gluc或Mluc質粒15µg共轉染。6h后換新鮮DMEM培養基。

2．提取病毒上清：轉染48-72hours后，將含有病毒液的培養基轉移到15ml離心管中,在低溫4攝氏度條件下，3000rpm，離心10min去除片狀沉淀的細胞碎片。

3．濃縮病毒：將病毒上清用0.45um濾器過濾至濃縮離心管中，2000rpm，4℃，15min離心。濃縮液收集于500µl離心管中，-80℃保存。

1.慢病毒感染&篩選

1.感染前一天(Day1)，消化4T1細胞并計數，將細胞鋪于24孔板中（以便在感染前細胞達到30%-50%的匯合度，37°C過夜孵化細胞。

2.(Day2) 解凍低溫保存的慢病毒液，并且制備1：2病毒稀釋液200µl加入細胞中。

3.向每孔加入Polybrene達到終濃度6ug/ml，晃勻孔板，37度孵化過夜。

4.(Day3)移去含有慢病毒的培養基，加入500µl*培養基。

5.(Day4)換液，加入300µg/ml  Hygromycin（Sigma）來選擇穩定感染的細胞克隆。

6.(Day4－7），每24h換液，300µg/ml Hygromycin（Sigma）來選擇穩定感染的細胞克隆。

維持培養。

7.(Day8－12）細胞逐漸由24孔板傳入6孔板、6cm盤和10cm盤中100µg/ml Hygromycin維持培養。

8. 4T1-Gluc/Mluc細胞系鑒定: 取5×104細胞，用Passive Lysis裂解液裂解，加入熒光素酶作用底物，將轉染質粒的細胞與陰性，陽性對照共同進行單報告基因檢測。GFP和mCherry表達通過熒光顯微鏡觀察。

?培養條件 ：置于37℃、5％CO2培養箱中，用含10％胎牛血清（FBS;    Hyclone, Tauranga, New Zealand）和1％雙抗（100 U/ ml青霉素和100 μg/ ml鏈霉素，Hyclone, Logan, UT, USA）的高糖DMEM培養基培養，培養一天（密度大概80%）按照1：3的比例傳代。

?細胞傳代所需時間：1天/代 

?篩選標記維持壓力和選擇壓力：Hygromycin 100ug/ml 和300ug/ml 。

"NCI-H460 [H460] Cell<人大細胞肺癌細胞系>

細胞形態特性：詳見細胞說明書

778571-57-6

細胞生長特性：貼壁

冷凍細胞解凍程序：依據細胞株數據單之基礎培養基種類、血清種類和其它之成份和比例，制備培養基。絕大多數之細胞均無法立即適應不同之基礎培養基或不同之血清種類，若因實驗需要，必須有所不同時，務必以緩慢比例漸次改變培養基組成，確定細胞適應后，方進行所需之實驗。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,馬血清)，對細胞而言差異極大，請務必依據細胞株資料單之血清種類培養之。將培養基置于３７°C水槽中回溫，回溫后噴以７０%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。取出冷凍管，立即放入３７°C水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發生污染。輕搖冷凍管使其在１分鐘內全部融化后，以７０%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺內。依據細胞種類和濃度，于無菌操作臺內取１０ml培養基加至T２５或T７５flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T２５或T７５flask內之培養基，混合均勻，放入３７°C，５%CO２培養箱培養。對絕大多數細胞而言，１%以下之冷凍保護劑DMSO，不會對細胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍細胞中去除，待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數因對DMSO敏感或會造成細胞分化之細胞，需立即去除DMSO者，則可將解凍后之細胞懸浮液放入５-１０ml培養基中，離心３００xg(約１０００rpm)，５分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養基，將細胞均勻混合后，轉移至培養瓶中，再放入３７°C，５%CO２培養箱培養。

NCI-H460 [H460] Cell<人大細胞肺癌細胞系>

細胞產品包裝：復蘇形式：T25培養瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

MDA-MB-175細胞系；細胞傳代方法：1：2—1：6傳代，每周換液2—3次；細胞形態特性：上皮細胞樣；細胞生長特性：松散貼壁；細胞背景資料：該細胞源自一位54歲患有乳腺導管癌白人女性的胸腔積液。

HCT116[HCT116]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

COV434細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態特性：上皮細胞；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

MDA-MB-435-LUC 人乳腺癌高轉移細胞-熒光素酶標記

MDA-MB-435-GFP 人乳腺癌高轉移細胞-綠色標記

MDA-MB-468-LUC 人乳腺癌細胞-熒光素酶標記

MDA-MB-468-GFP 人乳腺癌細胞-綠色標記

MFC-LUC 小鼠胃癌細胞-熒光素酶標記

MFC-GFP 小鼠胃癌細胞-綠色標記

MG-63-LUC 人成骨肉瘤細胞-熒光素酶標記

MG-63-GFP 人成骨肉瘤細胞-綠色標記

MGC-803-LUC 人胃腺癌-熒光素酶標記

MGC-803-GFP 人胃腺癌-綠色標記

MGC-823-LUC 人低分化前胃癌細胞-熒光素酶標記

MGC-823-GFP 人低分化前胃癌細胞-綠色標記

MKN-28-LUC 人胃癌高轉移細胞-熒光素酶標記

MKN-28-GFP 人胃癌高轉移細胞-綠色標記

MKN45-LUC 人胃癌細胞-熒光素酶標記

MKN45-GFP 人胃癌細胞-綠色標記

MRC-5-LUC 人胚肺成纖維細胞

MRC-5-GFP 人胚肺成纖維細胞

MV3-LUC 人黑色素瘤細胞-熒光素酶標記

MV3-GFP 人黑色素瘤細胞-綠色標記

NCI-H1650-LUC 人非小細胞肺癌細胞-熒光素酶標記

NCI-H1650-GFP 人非小細胞肺癌細胞-綠色標記

NCI-H1975-LUC 人肺腺癌細胞-熒光素酶標記

NCI-H1975-GFP 人肺腺癌細胞-綠色標記

NCI-H446-LUC 人小細胞肺癌細胞-熒光素酶標記

NCI-H446-GFP 人小細胞肺癌細胞-綠色標記

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NCI-N87[N87]-LUC 人胃癌細胞-熒光素酶標記

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NUTU-19-LUC 大鼠卵巢癌細胞-熒光素酶標記

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SRA01/04-GFP 人晶體上皮細胞-綠色標記

SW116-LUC 人大腸癌細胞-熒光素酶標記

SW116-GFP 人大腸癌細胞-綠色標記

SW1990-LUC 人胰腺腺癌-熒光素酶標記

SW1990-GFP 人胰腺腺癌-綠色標記

SW480-LUC 人結腸癌細胞-熒光素酶標記

SW480-GFP 人結腸癌細胞-綠色標記

SW620-LUC 人結腸癌細胞-熒光素酶標記

SW620-GFP 人結腸癌細胞-綠色標記

T24-LUC 人膀胱移行細胞癌細胞-熒光素酶標記

T24-GFP 人膀胱移行細胞癌細胞-綠色標記

T47D-LUC 人乳腺癌細胞-熒光素酶標記

T47D-GFP 人乳腺癌細胞-綠色標記

Tca-8113-LUC 人舌癌細胞-熒光素酶標記

Tca-8113-GFP 人舌癌細胞-綠色標記

TE-10-LUC 人食管癌細胞-熒光素酶標記

TE-10-GFP 人食管癌細胞-綠色標記

TE-11-LUC 人食管癌細胞-熒光素酶標記

TE-11-GFP 人食管癌細胞-綠色標記

TE-13-LUC 人食管癌細胞-熒光素酶標記

TE-13-GFP 人食管癌細胞-綠色標記

U-2OS-LUC 人骨肉瘤細胞-熒光素酶標記

U-2OS-GFP 人骨肉瘤細胞-綠色標記

U251-LUC 人神經膠質瘤細胞-熒光素酶標記

U251-GFP 人神經膠質瘤細胞-綠色標記

U87MG-LUC 人惡性膠質母細胞瘤細胞

U87MG-GFP 人惡性膠質母細胞瘤細胞

U937-LUC 人白血病細胞-熒光素酶標記

U937-GFP 人白血病細胞-綠色標記

Vero-LUC 綠猴腎細胞-熒光素酶標記

Vero-GFP 綠猴腎細胞-綠色標記