中文名稱：LNCaP clone FGC-LUC人前列腺癌熒光素酶細胞 處理方法

【細胞傳代】：1:3 傳代

【細胞活力】：90％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

【細胞檢測】：細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

【細胞凍存】：液氮凍存（基礎培養基+10%DMSO+20%FBS）

【細胞運輸】：干冰運輸（1 Vial）或活細胞運輸（T-25 flasks）

詳細背景： 這株細胞的細胞骨架染色突出呈現肌動蛋白，在細胞質中有豐富的平行微絲。有報道稱在1uM血管緊張素II存在下，它們會收縮。細胞在軟瓊脂中形成克隆，SV40大T抗原陽性。

細胞來源： 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外著名大學建系

規格：T25

形態特征：

生長狀態：成纖維細胞樣

特征特性：貼壁生長

培養條件：DMEM(高糖）+10%FBS（推薦BI優等胎牛血清貨號：04-001-1acs）

傳代方法：消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。

凍存條件無血清凍存液規格：100ML

支原體檢測：陰性

使用權限：A類

參考文獻：

供應商：上海琛藝實業有限公司

復蘇周期：10個工作日左右

培養步驟：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

LNCaP clone FGC-LUC人前列腺癌熒光素酶細胞 處理方法

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右*培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右*培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

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