上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發、生產、經營為一體的專業化生物工程公司。公司新引進細胞上千株，其中人的已通過STR鑒定的有幾百株，歡迎各位選購。。。。。。

產品名稱：K562-LUC人白血病熒光素酶標記細胞 處理方法
包裝：內層無菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說明書
細胞來源：ATCC、sciencell、ICLC
貨期：1-2周
運輸方式：快遞運輸
售后：收到細胞后12天，如發現細胞有質量問題（如污染，死亡，快遞運輸等原因）時，應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員，我們將盡快為您解決！

細胞生長特性：貼壁生長
細胞培養實驗中常見問題總結：１)一般客戶拿到細胞后，應該注意什么？客戶收到細胞后先不開蓋，放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞后觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞１００X，２００X各一張)，排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過８０%匯合度時，將培養瓶中培養液吸出，留下１０ml培養液繼續培養；超過８０%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞，吸出培養液、１０００轉/分鐘離心２分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。細胞消化液建議使用PBS配制，慎用Hanks液配制；２)快遞細胞多久能到，是寄凍存的細胞還是復蘇好的細胞？我們采用快遞發貨，一般外地２--３天，寄細胞前請確認當地溫度，如果氣溫低于４度的，則采用郵寄凍存細胞；３)可否使用與原先培養條件不同之培養基？不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基，若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基，細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活；４)可否使用與原先培養條件不同之血清種類？不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
細胞產品包裝：復蘇形式：T25培養瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)
K562-LUC人白血病熒光素酶標記細胞 處理方法操作說明：
1)對于常溫運輸的細胞，收到細胞后，檢查是否有運輸問題，即細胞培養瓶或管是否破損，細胞培養液是否溢出。若沒有運輸問題，請75%酒精消毒后，保留封口膜，放入細胞培養箱中靜置。嚴格檢查培養箱的參數：溫度，濕度和CO2濃度。細胞靜置時間一般為6-12小時后，細胞狀態穩定后，即可開始后續操作。選用正確的細胞培養體系，A2780(人卵巢癌細胞)嚴格按照說明書的培養條件進行培養。條件允許，培養的前三天內做細胞拍照記錄，通過郵件發送給我們做及時狀態跟蹤。
2)對于干冰運輸的細胞，請取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。然后將其復蘇培養，次日更換培養液。
?細胞名稱 K562-LUC人白血病熒光素酶標記細胞 
?組織  小鼠乳腺癌細胞系
?母細胞來源  客戶
?轉染方法與標記過程的描述 慢病毒轉染Hygromycin篩選 
1.質粒部分
1.酶切載體：pGL4.10（luc2）由酶切獲得1400bp的luc2基因片斷；EGFP和mCherry片段由PCR擴增獲得700-800bp左右片段；pSin-hyg-T2A載體酶切線性化。
2.電泳和膠回收：上述酶切產物DNA電泳，TAKARA試劑盒膠回收，回收產物取少量電泳鑒定。
3.連接載體與目的片段:使用Invitrogen T4連接酶連接luc2、EGFP或mCherry片段和pSin-hyg-T2A線性化載體，連接使用20ul體系，25℃，10min。
4.轉化：感受態菌One Shot Stbl3在冰上融化后，加入連接產物，靜置25min后在水浴42℃，45sec熱休克，后加入250ul無抗培養基225轉搖菌1h，將轉化的菌鋪于有氨芐抗性平板37度過夜。
5.挑取單克隆：觀察平板后挑取15個單克隆至含2ml氨芐抗性 LB培養基搖菌管中，255轉搖菌6.5h。
6.小抽質粒與鑒定：使用堿裂解法小抽，質粒用25ul含RNA酶ddH2O溶解；酶切鑒定: 重組質粒用通過酶切鑒定。
7.熒光素表達鑒定: 重組質粒pSin-hyg-GFP/luc2（以下簡稱Gluc）或pSin-hyg-mCherry/luc2（以下簡稱Mluc） 轉染293T細胞：DNA定量后，使用PEI轉染Gluc或Mluc至24孔板已預鋪的293T細胞中。轉染采用脂質體法轉染，試劑采用JetPEI (Polyplus公司)。兩管EP管中分別加入50ul生理鹽水，其中一管加入1ug量的質粒（DNA體積=1ug/DNA濃度），輕輕震蕩混勻，再輕微離心；在另一管中加入PEI 2ul輕輕震蕩混勻，輕微離心，然后把PEI管中的溶液加入含有的質粒管中，室溫孵育20min。將脂質體包繞DNA的混合液加入需要轉染的24孔內，37 ℃、5 % CO2條件下培養，8小時后換培養液。
8.報告基因檢測：Passive Lysis Agent裂解細胞，加入熒光素酶作用底物，將轉染質粒的細胞與陰性，陽性對照共同進行單報告基因檢測。
9.質粒中抽：取1ml轉染報告基因檢測正確的菌液加入100ml氨芐抗性的LB培養基中搖菌過夜，使用Invitrogen試劑盒中抽，產物電泳鑒定，－20℃保存。