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K562/Adr-GFP人白血病阿霉素耐藥株綠色標(biāo)記細(xì)胞 處理方法

來源:上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司   2020年03月18日 15:48  

K562/Adr-GFP人白血病阿霉素耐藥株綠色標(biāo)記細(xì)胞 處理方法

規(guī)格:T25

形態(tài)特征:

生長狀態(tài):成纖維細(xì)胞樣

特征特性:貼壁生長

培養(yǎng)條件:DMEM(高糖)+10%FBS(推薦BI優(yōu)等胎牛血清貨號:04-001-1acs

傳代方法:消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。

凍存條件無血清凍存液規(guī)格:100ML

支原體檢測:陰性

使用權(quán)限:A類

參考文獻(xiàn):

供應(yīng)商:上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司

復(fù)蘇周期:10個工作日左右

1) 來源:人臍帶組織

 

2) 形態(tài):內(nèi)皮細(xì)胞

 

3) 含量:>1x106

 

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

 

5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

運(yùn)輸和保存

 

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

 

(1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;

(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

 

(3)收到細(xì)胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

 

IEC-6-LUC大鼠小腸引窩上皮熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞 )用途:僅供科研使用。

 

細(xì)胞接收后的處理:

 

1) 收到細(xì)胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

 

2) 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時,在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請?jiān)?0X和20×物鏡下,同時給剛收到的細(xì)胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

 

3) 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

 

4) 貼壁細(xì)胞:在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

 

5) 懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基)。

 

6)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后次傳代建議1:2傳代 。   

 

一.K562/Adr-GFP人白血病阿霉素耐藥株綠色標(biāo)記細(xì)胞 處理方法培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

 

1) 準(zhǔn)備ECM培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,5%;添加對應(yīng)因子;雙抗,1%。

 

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

 

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

 

二. 細(xì)胞處理:

 

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天檢查細(xì)胞密度。

 

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

 

對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

 

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

 

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

 

3. 按6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

 

4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基瓶中。

 

注:di一次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

 

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

 

下面T25瓶為例;

 

1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

 

2.1000rpm離心分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。明舟生物(mingzhoubio)按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。

 

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

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