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K562/Adr-LUC人白血病阿霉素耐藥株熒光素酶標記細胞 處理方法

來源:上海琛藝實業有限公司   2020年03月18日 15:31  

K562/Adr-LUC人白血病阿霉素耐藥株熒光素酶標記細胞 gzsz傳代細胞,活性好、存活率高、質量保證,生長狀態良好,沒有細菌 真菌 支原體等微生物污染。IEC-6細胞一般以T25培養瓶包裝,容積75ml細胞數量可達10的6次方左右。
細胞名稱:K562/Adr-LUC人白血病阿霉素耐藥株熒光素酶標記細胞 處理方法


物種:大鼠
規格:T25培養瓶,1×106cells
形態特征:上皮細胞樣
生長特性:貼壁
產品描述
皮質醇可抑制該細胞的生長。該細胞表達腸上皮*抗原,在20代以前保持恒定的生長速度和細胞形態,此后生長速度迅速下降,細胞形態也發生改變。
培養條件:DMEM-H 5%FBS 0.01mg/ml Insulin
傳代方法:1:3-1:6傳代,每周換液2次。
IEC-6細胞復蘇時如何換液呢?
1凍存細胞取出后37℃速溶,取15ml離心管,加入10ml含血清培養基,將凍存管中液體(通常1.5ml)也加入離心管中,習慣輕吹幾下混勻,1200轉常溫離心5min,去掉上清,加入5ml含血清培養基,輕吹制成細胞懸液,加入到培養瓶中,即可。
注意,新復蘇的IEC-6細胞不要經常去看去動。
換液的話,只要把培養基吸出,再加入新的培養基就可以了
如果你復蘇的細胞長得很不均勻,可以胰酶消化下來再混勻后在重新加進去(像正常細胞一樣做)。
兩種方案可供選擇:
一、復蘇時,行離心,棄上清后,種入瓶中。主要目的是防止DMSO對細胞造成損害,但剛復蘇的細胞教脆弱,離心易導致細胞破碎。
二、IEC-6細胞復蘇時,直接將凍存管里的液體倒入培養瓶中,另外添加適量的培養基,孵箱24h,待貼壁后行常規換液。省去了離心一步,避免離心時細胞破裂。但DMSO未能去除,長時間培養可能會對細胞有損害。個人覺得第二種方案較方便。
細胞傳代步驟: 如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞復蘇步驟: 將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞凍存步驟: 待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞運輸: 干冰運輸(2ml凍存管)或活細胞運輸(T25細胞瓶)
IEC-6-LUC大鼠小腸引窩上皮熒光素酶標記細胞 處理步驟
1) 來源:人臍帶組織

2) 形態:內皮細胞

3) 含量:>1x106

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;
(2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

(3)收到細胞后請拍照,3天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。

HUVEC-GFP 人臍靜脈血管內皮細胞-綠色熒光標記

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IEC-6-GFP 大鼠小腸引窩上皮細胞-綠色標記

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K562/Adr-LUC 人白血病阿霉素耐藥株-熒光素酶標記

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