產品A名稱：Ishikawa-GFP人子宮內膜癌綠色標記細胞 培養步驟
中文名稱：Ishikawa-GFP人子宮內膜癌綠色標記細胞 
規格：T25
形態特征：
生長狀態：成纖維細胞樣
特征特性：貼壁生長
培養條件：DMEM(高糖）+10%FBS（推薦BI優等胎牛血清貨號：04-001-1acs）
傳代方法：消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
凍存條件無血清凍存液規格：100ML
支原體檢測：陰性
使用權限：A類
參考文獻：
供應商：上海琛藝實業有限公司
復蘇周期：10個工作日左右
 
培養步驟：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
 
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右*培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
Ishikawa-GFP人子宮內膜癌綠色標記細胞 培養步驟

收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將15ml離心管置于37℃培養約2-3h。
離心棄去15ml離心管中的培養基，細胞沉淀用新鮮的*培養基重懸并培養。
如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。

細胞用途：僅供科研使用。

本公司的細胞培養操作規程，供參考

一．培養基及培養凍存條件準備：

準備RPMI-1640培養基，90%；優質胎牛血清，10%。
培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
細胞處理：
復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

1.      將培養瓶中細胞輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液。

2.      根據細胞的生長狀態，按1:2或以上比例用新鮮培養基重懸細胞，將合適量培養液移入到T-25培養瓶中或T-75培養瓶中培養。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。懸浮細胞直接計數后離心，用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。