HepG2-LUC人肝癌熒光素酶標記細胞 培養方法
細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
細胞形態特性：詳見細胞說明書
在細胞培養過程中會出現這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞培養過程中生長不好、甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養細胞生長不好》可能原因：細胞本身的狀態》1)細胞傳代次數多，細胞老化；2)細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；3)細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；4)胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未*分離而成團，細胞死亡；5)細胞的凍存與復蘇：慢凍速融。污染：1)支原體污染；2)霉菌污染；培養基或血清：1)更換血清或培養基之前未進行驗證；2)選擇的培養基是否合適；3)培養基配制是否準確無誤；培養環境：1)CO2供應是否正常；2)培養箱或搖床溫度控制是否正確；解決方法：根據以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案》1)注意細胞的本身狀態：如傳代次數、接種量等；2)避免產生污染（用正規、合法、可溯源的血清）；3)要用合適的血清或培養基，經過驗證；4)注意實驗室的環境；二、培養細胞死亡》可能原因：1)培養箱內無CO2；2)培養箱內溫度波動太大；3)細胞凍存或復蘇過程中損傷；4)培養液滲透壓不正確；5)培養液中有毒代謝產物堆積；解決方法：1)檢測培養箱內CO2；2)檢查培養箱內溫度；3)取新的保存細胞種；4)檢測培養液滲透壓；5)換入新鮮培養液。
HepG2-luc Cell
325-89-3
細胞培養中常用設施及設備：實驗室設計：細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于一室，而洗刷消毒在另一室。常用設施及設備：1)超凈工作臺：也稱凈化工作臺，分為側流式、直流式和外流式三大類。2)無菌操作間：一般由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養箱、離心機、倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱、冷藏器及消毒好的無菌物品等。3)操作間：普通培養箱、離心機、水浴鍋、定時鐘、普通天平及日常分析處理物。4)洗刷消毒間：烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。5)分析室：顯微鏡、計算機及打印機等。
HepG2-LUC人肝癌熒光素酶標記細胞 培養方法
細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分
細胞產品包裝：復蘇形式：T25培養瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)
IM9細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸?。患毎尘百Y料：B淋巴細胞；女性
SNU-5細胞系；細胞傳代方法：2-3天補液一次；細胞形態特性：上皮細胞樣；細胞生長特性：多細胞聚集、懸浮生長；細胞背景資料：該細胞來源于一名低分化胃癌患者的轉移性腹水，1987年分離建立。該細胞表達CEA和TAG-72。
NCI-H2087細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：4傳代；每周換液2次；細胞形態特性：上皮樣；細胞生長特性：懸浮生長，有少數細胞疏松貼壁；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
MDA-MB-175細胞系；細胞傳代方法：1：2—1：6傳代，每周換液2—3次；細胞形態特性：上皮細胞樣；細胞生長特性：松散貼壁；細胞背景資料：該細胞源自一位54歲患有乳腺導管癌白人女性的胸腔積液。
CAL-62細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
A375[A-375]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
FTC133細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：甲狀腺濾泡細胞癌；男性
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系
HepG2-luc|人肝癌細胞
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
MDA-MB-436細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代，每周換液2—3次；細胞形態特性：多角形；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：該細胞源于一名43歲患有乳腺腺癌女性的胸腔積液。
BxPC3細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
MT-3細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
BMDC細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：樹突狀細胞
P815細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸??；細胞背景資料：肥大細胞瘤；雄性；DBA/2
傳代細胞培養注意事項：１)掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷；２)掌握好消化濃度，當消化液濃度過高時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。體內細胞培養及其操作步驟：瘤細胞懸液接種１)無菌選取生長良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或對數生長期培養瘤細胞；２)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經８０～１００目篩網過濾成細胞懸液；３)培養細胞應用PBS洗兩遍；４)計數并調整細胞濃度至１０(７)～１０(８)/ml；５)常規消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(０.１ml/部位，＞１０(６)細胞)。初次接種成功率低，細胞數盡可能多一些；６)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，后固定為一個相對穩定的時間。腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性(含大量紅細胞)，反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下：１)將凍存或培養的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數；２)消毒動物，左下腹穿刺接種１×１０(６)腹水瘤細胞；３)接種腹水瘤細胞后約７-１２d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３-５ml；４)抽取的腹水經３０００rpm離心１５min，收集上清，分裝凍存備用。
LN-18細胞系；細胞傳代方法：1：4-1：6傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：上皮細胞；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
MPC-11細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸浮生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
ISK細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
 
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
 
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右*培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
 
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