HCT8/Taxol-LUC人結腸癌紫杉醇耐藥株-熒光素酶標記培養方法-NTCC保藏中心
【Organism物種來源】Animal
【Tissue組織來源】
【Cell Type細胞類型】
【Product Format產品狀態】 frozen/live culture
【Morphology細胞形態】
【Culture Properties細胞特性】
【Biosafety Level生物安全級別】 1/2
Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.
【Disease細胞源疾病】
【Age年齡】
【Gender性別】 Male/Female
【Storage Conditions保存條件】 liquid nitrogen vapor phase
【Karyotype染色體組型】
【Images細胞圖片】 Cell Micrograph
【Derivation衍生細胞】
【Clinical Data臨床數據】
【Comments其他描述】
【Complete Growth Medium*培養基】 The base medium for this cell line is DMEM/RPMI-1640 Medium. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: fetal bovine serum to a final concentration of 10%.
【Subculturing傳代方法】
Volumes are given for a 75 cm2 flask. Increase or decrease the amount of dissociation medium needed proportionally for culture vessels of other sizes.
Remove and discard culture medium.
Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution to remove all traces of serum that contains trypsin inhibitor.
Add 2.0 to 3.0 mL of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 5 to 15 minutes).
Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate dispersal.
Add 6.0 to 8.0 mL of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting.
Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.
Incubate cultures at 37°C.
Subc*tion Ratio: A subc*tion ratio of 1:2 to 1:6 is recommended
Medium Renewal: 2 to 3 times per week
【Cryopreservation凍存條件】
【Freeze Medium凍存培養基】Complete growth medium supplemented with 5% (v/v) DMSO
【Storage Temperature保存溫度】 Liquid nitrogen vapor phase
【Culture Conditions培養條件】
【Atmosphere培養環境】 Air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
【Temperature培養溫度】 37°C
【STR Profile圖譜】
【Population Doubling Time倍增殖時間】
【References參考文獻】
HCT8/Taxol-LUC人結腸癌紫杉醇耐藥株-熒光素酶標記培養方法操作步驟:
請收到細胞后,在倒置鏡下(建議在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
(一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,吸出培養液,換 10ml新鮮培養液后繼續培養。
(二) (二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養。具體步驟如下:
1.棄去培養液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,倒放于37℃培養箱1-3分鐘預熱,之后翻轉培養瓶10-30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加*培養基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養瓶中。
如果沒有特別說明,收到細胞后的*次傳代一般是一傳二。
注:1、觀察細胞建議在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否 則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基,細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。3、有些細胞貼壁不牢,如發現貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內。4、收到細胞后,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請及時與我們。
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