當實驗新手使用血清時遇到這些問題應“淡定”處理:
1. 怎樣去除沉淀物?
技術解答:若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。
我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。
2. 我的FBS部分解凍,該怎么辦?
技術解答:讓血清*解凍,輕輕旋轉血清瓶, 然后重新冷凍血清。血清質量不會受到影響。
3. 怎樣熱滅活血清?
技術解答:血清熱滅活是在水浴56度,保持30分鐘, 水位應該高于血清水位。在熱滅活過程中,溫度的調節,通過監控含同樣體積的水的參照瓶里的水溫進行調節。在熱滅活過程必須旋轉瓶子每5 分鐘混合一次,確保受熱均勻。使用的溫度計必須經過校準!
加熱可以滅活補體系統,激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁,污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞,生長狀態良好,與黑點出現前相比,沒有任何變化。
那么黑點的出現可能是因為:
1、配制培養基的pH值偏高,不宜細胞生長。
2、血清質量不好,反復凍融的結果。
3、培養原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。
4、細胞生長過老,破碎的細胞殘骸。
5、配制培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點。
好的血清才能讓實驗更加成功,結果更加,所以選擇一個好的血清對您的實驗來說是非常有必要的。
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