中文名稱：HCCLM3-GFP人肝癌細胞-綠色標記細胞 培養步驟 已通過STR鑒定
規格：T25
形態特征：
生長狀態：成纖維細胞樣
特征特性：貼壁生長
培養條件：DMEM(高糖）+10%FBS（推薦HAKATA優等胎牛血清貨號：HN-FBS-500）
傳代方法：消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
凍存條件無血清凍存液規格：100ML
支原體檢測：陰性
使用權限：A類
參考文獻：
供應商：上海琛藝實業有限公司
復蘇周期：10個工作日左右
 HCCLM3-GFP人肝癌細胞-綠色標記細胞 培養步驟-NTCC保藏中心
【Organism物種來源】Animal 
【Tissue組織來源】 
【Cell Type細胞類型】 
【Product Format產品狀態】 frozen/live culture
【Morphology細胞形態】 
【Culture Properties細胞特性】 
【Biosafety Level生物安全級別】 1/2
Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.

【Disease細胞源疾病】
【Age年齡】 
【Gender性別】 Male/Female
【Storage Conditions保存條件】 liquid nitrogen vapor phase
【Karyotype染色體組型】 
【Images細胞圖片】 Cell Micrograph
【Derivation衍生細胞】
【Clinical Data臨床數據】 
【Comments其他描述】 
【Complete Growth Medium*培養基】 The base medium for this cell line is DMEM/RPMI-1640 Medium. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: fetal bovine serum to a final concentration of 10%. 
【Subculturing傳代方法】 
Volumes are given for a 75 cm2 flask. Increase or decrease the amount of dissociation medium needed proportionally for culture vessels of other sizes.
Remove and discard culture medium.
Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution to remove all traces of serum that contains trypsin inhibitor.
Add 2.0 to 3.0 mL of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 5 to 15 minutes).
Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate dispersal.
Add 6.0 to 8.0 mL of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting.
Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.
Incubate cultures at 37°C.
Subc*tion Ratio: A subc*tion ratio of 1:2 to 1:6 is recommended
Medium Renewal: 2 to 3 times per week
【Cryopreservation凍存條件】 
【Freeze Medium凍存培養基】Complete growth medium supplemented with 5% (v/v) DMSO
【Storage Temperature保存溫度】 Liquid nitrogen vapor phase
【Culture Conditions培養條件】 
【Atmosphere培養環境】 Air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
【Temperature培養溫度】 37°C
【STR Profile圖譜】 
【Population Doubling Time倍增殖時間】
【References參考文獻】
培養步驟：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
 
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右*培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
 
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
 
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右*培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
 
上海琛藝是一家專業從事細胞培養相關產品的公司，擁有獨立細胞房（可隨時約定參觀），供應胎牛血清，STR鑒定細胞，感受態細胞等，專業，專注，性價比高，是您Shou選之家。