中文名稱：GBC-SD-LUC人膽囊癌細胞-熒光素酶標記 培養步驟
規格：T25
形態特征：
生長狀態：成纖維細胞樣
特征特性：貼壁生長
培養條件：DMEM(高糖）+10%FBS
傳代方法：消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
凍存條件無血清凍存液規格：100ML
支原體檢測：陰性
使用權限：A類
參考文獻：
供應商：上海琛藝實業有限公司
復蘇周期：10個工作日左右
安全性：所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。
培養條件：

GBC-SD-LUC人膽囊癌細胞-熒光素酶標記 已通過STR鑒定
?母細胞來源  客戶
?轉染方法與標記過程的描述 慢病毒轉染Hygromycin篩選 
1.質粒部分
1.酶切載體：pGL4.10（luc2）由酶切獲得1400bp的luc2基因片斷；EGFP和mCherry片段由PCR擴增獲得700-800bp左右片段；pSin-hyg-T2A載體酶切線性化。
2.電泳和膠回收：上述酶切產物DNA電泳，TAKARA試劑盒膠回收，回收產物取少量電泳鑒定。
3.連接載體與目的片段:使用Invitrogen T4連接酶連接luc2、EGFP或mCherry片段和pSin-hyg-T2A線性化載體，連接使用20ul體系，25℃，10min。
4.轉化：感受態菌One Shot Stbl3在冰上融化后，加入連接產物，靜置25min后在水浴42℃，45sec熱休克，后加入250ul無抗培養基225轉搖菌1h，將轉化的菌鋪于有氨芐抗性平板37度過夜。
5.挑取單克隆：觀察平板后挑取15個單克隆至含2ml氨芐抗性 LB培養基搖菌管中，255轉搖菌6.5h。
6.小抽質粒與鑒定：使用堿裂解法小抽，質粒用25ul含RNA酶ddH2O溶解；酶切鑒定: 重組質粒用通過酶切鑒定。
7.熒光素表達鑒定: 重組質粒pSin-hyg-GFP/luc2（以下簡稱Gluc）或pSin-hyg-mCherry/luc2（以下簡稱Mluc） 轉染293T細胞：DNA定量后，使用PEI轉染Gluc或Mluc至24孔板已預鋪的293T細胞中。轉染采用脂質體法轉染，試劑采用JetPEI (Polyplus公司)。兩管EP管中分別加入50ul生理鹽水，其中一管加入1ug量的質粒（DNA體積=1ug/DNA濃度），輕輕震蕩混勻，再輕微離心；在另一管中加入PEI 2ul輕輕震蕩混勻，輕微離心，然后把PEI管中的溶液加入含有的質粒管中，室溫孵育20min。將脂質體包繞DNA的混合液加入需要轉染的24孔內，37 ℃、5 % CO2條件下培養，8小時后換培養液。
8.報告基因檢測：Passive Lysis Agent裂解細胞，加入熒光素酶作用底物，將轉染質粒的細胞與陰性，陽性對照共同進行單報告基因檢測。
9.質粒中抽：取1ml轉染報告基因檢測正確的菌液加入100ml氨芐抗性的LB培養基中搖菌過夜，使用Invitrogen試劑盒中抽，產物電泳鑒定，－20℃保存。

GBC-SD-LUC人膽囊癌細胞-熒光素酶標記 培養步驟
傳代方法：
  收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換 10ml新鮮培養液后繼續培養。
(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：
1. 棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，倒放于37℃培養箱1-3分鐘預熱，之后翻轉培養瓶10-30秒，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加*培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的di一次傳代一般是一傳二。
注：1、觀察細胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。
2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基，細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。
3、有些細胞貼壁不牢，如發現貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內。
4、收到細胞后，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯系。..

凍存方法：   凍存液：90%胎牛血清，10%DMSO
  儲存：液氮儲、