成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養箱


化工儀器網>技術中心>操作使用>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

EAC-GFP小鼠艾氏腹水癌細胞-綠色標記 培養方法

來源:上海琛藝實業有限公司   2020年02月22日 20:39  

上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發、生產、經營為一體的專業化生物工程公司。公司新引進細胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。
EAC-GFP小鼠艾氏腹水癌細胞-綠色標記 培養方法
?細胞名稱 EAC-GFP小鼠艾氏腹水癌細胞-綠色標記
?組織  小鼠乳腺癌細胞系
?母細胞來源  客戶
?轉染方法與標記過程的描述 慢病毒轉染Hygromycin篩選 
1.質粒部分
1.酶切載體:pGL4.10(luc2)由酶切獲得1400bp的luc2基因片斷;EGFP和mCherry片段由PCR擴增獲得700-800bp左右片段;pSin-hyg-T2A載體酶切線性化。
2.電泳和膠回收:上述酶切產物DNA電泳,TAKARA試劑盒膠回收,回收產物取少量電泳鑒定。
3.連接載體與目的片段:使用Invitrogen T4連接酶連接luc2、EGFP或mCherry片段和pSin-hyg-T2A線性化載體,連接使用20ul體系,25℃,10min。
4.轉化:感受態菌One Shot Stbl3在冰上融化后,加入連接產物,靜置25min后在水浴42℃,45sec熱休克,后加入250ul無抗培養基225轉搖菌1h,將轉化的菌鋪于有氨芐抗性平板37度過夜。
5.挑取單克隆:觀察平板后挑取15個單克隆至含2ml氨芐抗性 LB培養基搖菌管中,255轉搖菌6.5h。
6.小抽質粒與鑒定:使用堿裂解法小抽,質粒用25ul含RNA酶ddH2O溶解;酶切鑒定: 重組質粒用通過酶切鑒定。
7.熒光素表達鑒定: 重組質粒pSin-hyg-GFP/luc2(以下簡稱Gluc)或pSin-hyg-mCherry/luc2(以下簡稱Mluc) 轉染293T細胞:DNA定量后,使用PEI轉染Gluc或Mluc至24孔板已預鋪的293T細胞中。轉染采用脂質體法轉染,試劑采用JetPEI (Polyplus公司)。兩管EP管中分別加入50ul生理鹽水,其中一管加入1ug量的質粒(DNA體積=1ug/DNA濃度),輕輕震蕩混勻,再輕微離心;在另一管中加入PEI 2ul輕輕震蕩混勻,輕微離心,然后把PEI管中的溶液加入含有的質粒管中,室溫孵育20min。將脂質體包繞DNA的混合液加入需要轉染的24孔內,37 ℃、5 % CO2條件下培養,8小時后換培養液。
8.報告基因檢測:Passive Lysis Agent裂解細胞,加入熒光素酶作用底物,將轉染質粒的細胞與陰性,陽性對照共同進行單報告基因檢測。
9.質粒中抽:取1ml轉染報告基因檢測正確的菌液加入100ml氨芐抗性的LB培養基中搖菌過夜,使用Invitrogen試劑盒中抽,產物電泳鑒定,-20℃保存。
產品名稱:Hepa 1-6細胞 Hepa 1-6小鼠肝癌細胞
包裝:內層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細胞后12天,如發現細胞有質量問題(如污染,死亡,快遞運輸等原因)時,應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員,我們將盡快為您解決!

細胞生長特性:貼壁生長
細胞培養實驗中常見問題總結:1)一般客戶拿到細胞后,應該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞后觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養液吸出,留下10ml培養液繼續培養;超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復蘇好的細胞?我們采用快遞發貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當地溫度,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養條件不同之培養基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基,若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
細胞產品包裝:復蘇形式:T25培養瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)

免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 黄色网址免费下载| 亚洲国产精品久久久久久网站| 亚洲综合日韩在线| 日韩在线中文字幕一区| 少爷不要别揉了高H| 99热久久这里只精品国产WWW| 久久久久蜜桃精品成人片| 国产亚洲精品久久久久丝瓜| 精品国产成人亚洲午夜福利| 国产午夜精品一区理论片飘花| 美国毛片免费看| 国产精品怡红院永久免费| 免费观看日韩欧美| 无码内射成人免费喷射| 国产精品福利三区| 无码激情AV一区二区三区| 91视频一区二区| 无修无遮h韩漫视频网站| 国产亚洲精品777| 熟女亚洲综合精品伊人久久| 无码人妻精品国产日韩电影| 老湿机费x一分钟影院体验区| 伊人大蕉综合网站亚洲最大| 久久综合亚洲欧美区| 强上轮流内射高NP男男| 亚洲国产欧美日韩第一区| 中文字幕亚洲欧美日韩专区| 国产精品美女久久久久AV超清| 年轻妈妈的秘密性教育| 国产亚洲精品成人久久| 亚洲一区二区女搞男| 师生系列乱肉辣伦全文阅读| 精品性高朝久久久久久久| 欧美精品一区二区三区蜜臀| 久久久久青草大香线综合精品| 国产精品久久久天天影视香蕉| 伊人色综合视频一区二区三区| 亚洲精品久久AV无码蜜桃| 少妇高潮A片无套内谢麻豆传| 久久人妻AV一区二区软件| 国产欧美日韩精品视频|