CFPAC-1-GFP人胰腺癌細胞-綠色標記 培養步驟

• 細胞名稱  CFPAC-1-GFP人胰腺癌細胞-綠色標記
• 組織  小鼠乳腺癌細胞系
• 母細胞來源  客戶
• 轉染方法與標記過程的描述 慢病毒轉染Hygromycin篩選 

1. 質粒部分

1.酶切載體：pGL4.10（luc2）由酶切獲得1400bp的luc2基因片斷；EGFP和mCherry片段由PCR擴增獲得700-800bp左右片段；pSin-hyg-T2A載體酶切線性化。

2.電泳和膠回收：上述酶切產物DNA電泳，TAKARA試劑盒膠回收，回收產物取少量電泳鑒定。

3.連接載體與目的片段:使用Invitrogen T4連接酶連接luc2、EGFP或mCherry片段和pSin-hyg-T2A線性化載體，連接使用20ul體系，25℃，10min。

4.轉化：感受態菌One Shot Stbl3在冰上融化后，加入連接產物，靜置25min后在水浴42℃，45sec熱休克，后加入250ul無抗培養基225轉搖菌1h，將轉化的菌鋪于有氨芐抗性平板37度過夜。

5.挑取單克隆：觀察平板后挑取15個單克隆至含2ml氨芐抗性 LB培養基搖菌管中，255轉搖菌6.5h。

6.小抽質粒與鑒定：使用堿裂解法小抽，質粒用25ul含RNA酶ddH2O溶解；酶切鑒定: 重組質粒用通過酶切鑒定。

7.熒光素表達鑒定: 重組質粒pSin-hyg-GFP/luc2（以下簡稱Gluc）或pSin-hyg-mCherry/luc2（以下簡稱Mluc） 轉染293T細胞：DNA定量后，使用PEI轉染Gluc或Mluc至24孔板已預鋪的293T細胞中。轉染采用脂質體法轉染，試劑采用JetPEI (Polyplus公司)。兩管EP管中分別加入50ul生理鹽水，其中一管加入1ug量的質粒（DNA體積=1ug/DNA濃度），輕輕震蕩混勻，再輕微離心；在另一管中加入PEI 2ul輕輕震蕩混勻，輕微離心，然后把PEI管中的溶液加入含有的質粒管中，室溫孵育20min。將脂質體包繞DNA的混合液加入需要轉染的24孔內，37 ℃、5 % CO2條件下培養，8小時后換培養液。

8.報告基因檢測：Passive Lysis Agent裂解細胞，加入熒光素酶作用底物，將轉染質粒的細胞與陰性，陽性對照共同進行單報告基因檢測。

9.質粒中抽：取1ml轉染報告基因檢測正確的菌液加入100ml氨芐抗性的LB培養基中搖菌過夜，使用Invitrogen試劑盒中抽，產物電泳鑒定，－20℃保存

CFPAC-1-GFP人胰腺癌細胞-綠色標記 培養步驟

SNU４２３細胞保藏平臺；細胞生長特性：貼壁；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

KCL22S細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２傳代;細胞生長特性：懸浮;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10細胞、SHG-44細胞、SK UT 1細胞

GM-3573細胞;細胞背景資料：這是P３X６３Ag８(ATCCTIB-９)的一個不分泌克隆。Kappa鏈合成了但不分泌。能抗０.１mM８-氮雜鳥嘌呤但不能在HAT培養基中生長。據報道它是由于缺失了３-酮類固醇還原酶活性的膽固醇營養缺陷型。檢測表明肢骨發育畸形病毒(鼠痘)陰性。;細胞傳代方法：１：２傳代，３天內可長滿。;細胞生長特性：懸浮生長;細胞形態特性：淋巴母細胞;相關細胞有：CCD18細胞、COLO-394細胞、CCRF-CEM C7細胞

CFPAC-1 Cells|人胰腺導管癌貼壁細胞

Okayama University Medical School-23細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：OC-316細胞、H-2108細胞、ELD-1細胞

RC-4B/C細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：SW-948細胞、BA/F3細胞、SK Mel28細胞

L5178YR細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：D10細胞、L M (TK-)細胞、NCIH748細胞

Z138細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：５-１：１５傳代；每周２-３次。;細胞生長特性：懸浮生長;細胞形態特性：淋巴母細胞;相關細胞有：NCI-H520細胞、HeLa 229細胞、KATOIII細胞

LS 1034細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：３傳代，每周２-３次;細胞生長特性：貼壁生長;細胞形態特性：上皮細胞樣;相關細胞有：MNNG-HOS (TE 85, clone F-5)細胞、LY細胞、OVCA 433細胞

3T3 Swiss Albino細胞;細胞背景資料：３T３細胞株是１９６２年Todaro G和Green H從分離的瑞士小鼠胚胎中建立的；該細胞的生長受接觸性抑制，匯合狀態的單層細胞密度為４００００個細胞/平方厘米；檢測結果顯示該細胞鼠痘病毒陰性；在中生長較好，在某些玻璃表面上可能狀態不佳；細胞生長飽和時其密度可以達到約５００００ cells/cm２。;細胞傳代方法：１：３傳代；３-４天１次。;細胞生長特性：貼壁生長;細胞形態特性：成纖維細胞樣;相關細胞有：OVTOKO細胞、BNL CL2細胞、CCK81細胞

COLO 699細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：TE671/RD細胞、UCD-MLA-144細胞、ZR-75-30細胞

CHG-5細胞;細胞背景資料：少突神經膠質瘤；男性;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：SW1573細胞、A375.S2細胞、CL 1-5細胞

BGC-８２３傳代細胞復蘇中心；細胞生長特性：貼壁生長；細胞形態特性：上皮樣；細胞傳代方法：１：３傳代，２-３天換液一次

BGC-８２３傳代細胞復蘇平臺；細胞生長特性：貼壁生長；細胞形態特性：上皮樣；細胞傳代方法：１：３傳代，２-３天換液一次

ML-２傳代細胞實驗中心；細胞生長特性：懸浮；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

Z１３８復蘇細胞；細胞生長特性：懸浮；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

MOPC凍存細胞；細胞生長特性：半貼壁；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

Lncap細胞實驗室；細胞生長特性：貼壁生長；細胞形態特性：上皮樣；梭形；細胞傳代方法：１：２傳代

LTEP-sm細胞實驗中心；細胞生長特性：貼壁；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

NCI-H４４６細胞實驗平臺；細胞生長特性：貼壁/懸浮生長，混合；細胞形態特性：上皮樣；細胞傳代方法：１：２傳代

OUMS-２７傳代細胞國內實驗平臺；細胞生長特性：貼壁；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

L７８傳代細胞培養復蘇中心；細胞生長特性：貼壁；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

MCF-１０A傳代細胞培養復蘇平臺；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

HPF傳代細胞培養實驗中心；細胞生長特性：貼壁；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

MA８９１傳代細胞培養實驗平臺；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

MFHL-2細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：Normal fibroblast-10細胞、KLN205細胞、H-2198細胞

PA12細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：R-1059-D細胞、Tadarida brasiliensis 1 lung細胞、EMT-6細胞

SK ES 01細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２-１：５傳代；每周換液２-３次;細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分;細胞形態特性：上皮樣;相關細胞有：MKN45細胞、PSN-1細胞、NCI-H1385細胞

LS123細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：４—１：８傳代，每周換液２—３次;細胞生長特性：貼壁生長;細胞形態特性：上皮樣;相關細胞有：HS-68細胞、A-172 MG細胞、HSMC細胞

SHEE細胞;細胞背景資料：食管；上皮細胞;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：COLO320/DM細胞、SBC5細胞、Jurkat (clone E6-1)細胞

KYSE450細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２傳代;細胞生長特性：貼壁生長;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：NALM 6細胞、HEK293FT細胞、KMBC細胞

HCT-GEO細胞;細胞背景資料：結腸癌;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：SF 126細胞、H460細胞、NALM6細胞

NCI-H146細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２—１：６傳代，每周換液２-３次;細胞生長特性：懸浮生長;細胞形態特性：上皮細胞;相關細胞有：B16-F10細胞、HCC1143細胞、DLD-1細胞

Mc Coy細胞;細胞背景資料：成纖維細胞;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：FHs74 Int細胞、526細胞、KASUMI1細胞

MLA-144細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：H-1963細胞、WEHI 231細胞、P3X63Ag8653細胞

HDSMC實驗細胞凍存中心；細胞生長特性：貼壁；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

minkMv.l.lu傳代細胞培養凍存中心；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

HCC-２２７９傳代細胞培養凍存平臺；細胞生長特性：貼壁；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

NB４(NB-４)傳代細胞培養保藏中心；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

NCI-H１９１５[H１９１５]傳代細胞培養保藏平臺；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

BALL-１細胞專業復蘇中心；細胞生長特性：懸浮生長；細胞形態特性：淋巴母細胞；細胞傳代方法：１：２傳代

NCI-BL２１４１[BL２１４１]細胞專業復蘇平臺；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

ACC-３細胞專業實驗中心；細胞生長特性：貼壁生長；細胞形態特性：上皮樣；細胞傳代方法：消化３-５分鐘。１：２。３天內可長滿。

HL-６０ Clone １５細胞專業實驗平臺；細胞生長特性：懸浮生長；細胞形態特性：淋巴母細胞樣；細胞傳代方法：維持細胞濃度在１×１０５-１×１０６/ml,每２-３天換液１次。

U266S細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：３傳代,２-３天傳一代;細胞生長特性：懸浮生長 ;細胞形態特性：淋巴母細胞樣;相關細胞有：MC3T3-E1細胞、NCI-H2198細胞、SNU-449細胞

K7M2 wt細胞;細胞背景資料：骨肉瘤；肺轉移；雌性；BALB/c;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：Caov-4細胞、J-774A.1細胞、Jeko1細胞

Adeno 293細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２傳代;細胞生長特性：貼壁生長;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：COLO-824細胞、Hep-G2/C3A細胞、HCAEC細胞

STO細胞;細胞背景資料：STO是一株繼代生長的胚成纖維細胞系，可用于制備飼養層細胞（feederlayers）和其他研究。;細胞傳代方法：１：２傳代;細胞生長特性：貼壁生長;細胞形態特性：成纖維細胞樣;相關細胞有：NCIH1092細胞、WEHI3B細胞、H-146細胞

HCA-7細胞;細胞背景資料：結腸腺癌；女性;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：VP267細胞、Hep G2-Luc細胞、PBL細胞

MDA 231-LM2-4175細胞;細胞背景資料：乳腺癌;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：University of Michigan-Urothelial Carcinoma-14細胞、Ca761細胞、H719細胞

HOS TE85細胞;細胞背景資料：骨肉瘤；女性;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：Clone M-3細胞、MDA-1386細胞、Pro-Lec1.3C細胞

SV-HUC細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２傳代;細胞生長特性：貼壁生長 ;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：AD-293細胞、231-luc細胞、NCM356細胞

CWR22-R1細胞;細胞背景資料：２２RV１是來自異種移植(在閹割引起前列腺癌衰退又在其父親的雄性激素信賴型CWR２２嫁接后復發的小鼠中連續傳代)的人前列腺癌上皮細胞系。此細胞系表達前列腺特異抗原。二羥基睪丸脂酮輕微刺激細胞生長，經westernblot檢測溶解產物與抗雄性激素受體抗體起免疫反應。EGF刺激細胞生長，但TGFβ-１不能抑制細胞生長。該細胞在裸鼠中成瘤。;細胞傳代方法：消化３-５分鐘。１：２。３天內可長滿。;細胞生長特性：貼壁生長;細胞形態特性：上皮細胞;相關細胞有：Bat lung細胞、MCF-7B細胞、LS-411細胞

NCI-H292細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：３-１：８傳代；２-３天換液１次。;細胞生長特性：貼壁生長;細胞形態特性：上皮樣;相關細胞有：FC33細胞、GM04671細胞、Eca-109細胞

Granta519細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。;細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分;細胞形態特性：詳見細胞說明書;相關細胞有：TE15細胞、Balb/c 3T3細胞、Ishikawa細胞

KM.12細胞;細胞背景資料：詳見相關文獻介紹;細胞傳代方法：１：２傳代;細胞生長特性：貼壁生長;細胞形態特性：上皮樣;相關細胞有：HFLS細胞、GM02131細胞、SK HEP 01細胞

J７７４A１細胞專業凍存中心；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

SU-DHL-２細胞專業凍存平臺；細胞生長特性：懸浮；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

MHCC-９７L細胞專業保種中心；細胞生長特性：貼壁；細胞形態特性：上皮細胞樣；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

Kuffer細胞專業保種平臺；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

CFPAC-1 Cells|人胰腺導管癌貼壁細胞

KATO III細胞專業保藏中心；細胞生長特性：貼壁生長；細胞形態特性：上皮細胞；細胞傳代方法：１：２傳代。３天內可長滿。

H７４０２細胞專業保藏平臺；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

OVCAR４細胞科研復蘇中心；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

HEL ９２.１.７細胞科研復蘇平臺；細胞生長特性：懸浮生長；細胞形態特性：成淋巴細胞；細胞傳代方法：每周２-３次。

LX２細胞科研凍存中心；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

UMR１０６細胞科研凍存平臺；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

WEHI-３細胞科研實驗中心；細胞生長特性：懸浮；細胞形態特性：詳見細胞說明書；細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。