馬sIgA酶免檢測試劑盒（定量檢測）

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中馬分泌型免疫球蛋白A（sIgA）水平。用純化的馬分泌型免疫球蛋白A（sIgA）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入馬分泌型免疫球蛋白A（sIgA），再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的馬分泌型免疫球蛋白A（sIgA）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中馬分泌型免疫球蛋白A（sIgA）含量。

試劑盒組成：

注：標準品濃度依次為：48、24、12、6、3、0 μg/mL.

操作步驟

• 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；。
• 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
• 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
• 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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檢測范圍：                                              

1.5 μg/mL - 48 μg/mL

靈敏度：                                              

低檢測濃度小于0.1 μg/mL