Caco-2-LUC人結腸癌細胞-熒光素酶標記 處理步驟
細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
細胞形態特性：詳見細胞說明書
在細胞培養過程中會出現這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞培養過程中生長不好、甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養細胞生長不好》可能原因：細胞本身的狀態》1)細胞傳代次數多，細胞老化；2)細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；3)細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；4)胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未*分離而成團，細胞死亡；5)細胞的凍存與復蘇：慢凍速融。污染：1)支原體污染；2)霉菌污染；培養基或血清：1)更換血清或培養基之前未進行驗證；2)選擇的培養基是否合適；3)培養基配制是否準確無誤；培養環境：1)CO2供應是否正常；2)培養箱或搖床溫度控制是否正確；解決方法：根據以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案》1)注意細胞的本身狀態：如傳代次數、接種量等；2)避免產生污染（用正規、合法、可溯源的血清）；3)要用合適的血清或培養基，經過驗證；4)注意實驗室的環境；二、培養細胞死亡》可能原因：1)培養箱內無CO2；2)培養箱內溫度波動太大；3)細胞凍存或復蘇過程中損傷；4)培養液滲透壓不正確；5)培養液中有毒代謝產物堆積；解決方法：1)檢測培養箱內CO2；2)檢查培養箱內溫度；3)取新的保存細胞種；4)檢測培養液滲透壓；5)換入新鮮培養液。
Caco-2-LUC人結腸癌細胞-熒光素酶標記 處理步驟
細胞培養中常用設施及設備：實驗室設計：細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于一室，而洗刷消毒在另一室。常用設施及設備：1)超凈工作臺：也稱凈化工作臺，分為側流式、直流式和外流式三大類。2)無菌操作間：一般由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養箱、離心機、倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱、冷藏器及消毒好的無菌物品等。3)操作間：普通培養箱、離心機、水浴鍋、定時鐘、普通天平及日常分析處理物。4)洗刷消毒間：烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。5)分析室：顯微鏡、計算機及打印機等。
 

操作步驟：
請收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換 10ml新鮮培養液后繼續培養。
（二） (二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：
1.棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，倒放于37℃培養箱1-3分鐘預熱，之后翻轉培養瓶10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加*培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。
如果沒有特別說明，收到細胞后的*次傳代一般是一傳二。