BXPC-3（BXPC3）人胰腺腺癌細胞【已通過STR鑒定】

細胞英文(簡稱）：BXPC-3（BXPC3）

細胞名稱：BxPC-3-LUC人原位胰腺腺癌細胞-熒光素酶標記 處理方法

背景資料

該細胞株不表達囊腫性纖維化跨膜電導調節子(CFTR)。 

細胞來源：ATCC CRL-1687

代次：P3

規格：T25

細胞數：1x10^6 cells

組織來源：胰腺；腺癌

BXPC-3（BXPC3）人胰腺腺癌細胞【已通過STR鑒定】 形態：貼壁；上皮細胞樣

細胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細胞檢測：細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

培養條件：DMEM(高糖) +10% FBS；37℃，5% CO2

傳代方法：*建議1:2-1:3 兩天換液一次

凍存條件：90%FBS+10%DMSO

動物細胞培養,大致的步驟是這樣:

1.從動物胚胎或者一些剛出生的動物的器官或者組織上取得細胞,配制成細胞懸浮液.把細胞液放到培養瓶中,在培養箱里培養--------原代培養.

但是,不要以為這樣就能一直無限培養下去.

因為BXPC-3（BXPC3）人胰腺腺癌細胞【已通過STR鑒定】 在那個瓶壁上生長的時候,如果大量增殖,細胞之間會彼此相碰,細胞細胞就會停止分裂增殖,出現一種接觸抑制.

2.我們為了它們能繼續增殖,就用胰蛋白酶再把它們分開,然后再配制成細胞懸浮液,分開裝到好幾個瓶子里繼續培養--------傳代培養.

1. BxPC-3-LUC人原位胰腺腺癌細胞-熒光素酶標記 處理方法慢病毒感染&篩選

1.感染前一天(Day1)，消化4T1細胞并計數，將細胞鋪于24孔板中（以便在感染前細胞達到30%-50%的匯合度，37°C過夜孵化細胞。

2.(Day2) 解凍低溫保存的慢病毒液，并且制備1：2病毒稀釋液200µl加入細胞中。

3.向每孔加入Polybrene達到終濃度6ug/ml，晃勻孔板，37度孵化過夜。

4.(Day3)移去含有慢病毒的培養基，加入500µl*培養基。

5.(Day4)換液，加入300µg/ml  Hygromycin（Sigma）來選擇穩定感染的細胞克隆。

6.(Day4－7），每24h換液，300µg/ml Hygromycin（Sigma）來選擇穩定感染的細胞克隆。

維持培養。

7.(Day8－12）細胞逐漸由24孔板傳入6孔板、6cm盤和10cm盤中100µg/ml Hygromycin維持培養。

8. 4T1-Gluc/Mluc細胞系鑒定: 取5×10⁴細胞，用Passive Lysis裂解液裂解，加入熒光素酶作用底物，將轉染質粒的細胞與陰性，陽性對照共同進行單報告基因檢測。GFP和mCherry表達通過熒光顯微鏡觀察。