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BIU87-GFP人膀胱癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記 處理步驟

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2020年01月14日 08:06  

BIU-87細(xì)胞產(chǎn)品簡介:

細(xì)胞名稱:BIU87-GFP人膀胱癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記 處理步驟
組織來源:膀胱癌
培養(yǎng)條件:RPMI-1640 +10% FBS
形       態(tài):貼壁;上皮細(xì)胞樣
背       景:BIU-87建系于1989年,該細(xì)胞系來源于人膀胱乳頭狀移行上皮癌,通常采用5×108細(xì)胞0.2mL接種裸鼠皮下,呈進行性腫瘤生長,腫瘤結(jié)節(jié)病檢與原標(biāo)本癌組織相似。22代細(xì)胞群體倍增時間為34小時。細(xì)胞能在軟瓊脂上生長,克隆形成率23%。BIU-87細(xì)胞系對ConA,WGA,PSL均有凝集反應(yīng)。
 


背景描述

BIU-87細(xì)胞是由俞莉章等建系于1989年;BIU-87細(xì)胞來源于人膀胱乳頭狀移行上皮癌,通常采用5×10^8細(xì)胞、0.2ml的接種體積接種至裸鼠皮下;BIU-87細(xì)胞呈進行性腫瘤生長,腫瘤結(jié)節(jié)病檢與原標(biāo)本癌組織相似。BIU-87細(xì)胞22代群體倍增時間為34小時;BIU-87細(xì)胞能在軟瓊脂上生長,克隆形成率23%。BIU-87細(xì)胞對ConA、WGA、PSL均有凝集反應(yīng)。

生長培養(yǎng)基

RPMI-1640+10% FBS+1% P/S

培養(yǎng)條件

氣相:空氣,95%;CO2,5%

溫度:37℃

BIU87-GFP人膀胱癌細(xì)胞培養(yǎng)照片:

BIU87-GFP人膀胱癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記 操作說明:

1)對于常溫運輸?shù)募?xì)胞,收到細(xì)胞后,檢查是否有運輸問題,即細(xì)胞培養(yǎng)瓶或管是否破損,細(xì)胞培養(yǎng)液是否溢出。若沒有運輸問題,請75%酒精消毒后,保留封口膜,放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置。嚴(yán)格檢查培養(yǎng)箱的參數(shù):溫度,濕度和CO2濃度。細(xì)胞靜置時間一般為6-12小時后,細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,即可開始后續(xù)操作。選用正確的細(xì)胞培養(yǎng)體系,A2780(人卵巢癌細(xì)胞)嚴(yán)格按照說明書的培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)。條件允許,培養(yǎng)的前三天內(nèi)做細(xì)胞拍照記錄,通過郵件發(fā)送給我們做及時狀態(tài)跟蹤。

2)對于干冰運輸?shù)募?xì)胞,請取出冷凍管后,須立即放入37C水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。然后將其復(fù)蘇培養(yǎng),次日更換培養(yǎng)液。

BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)注意事項:

1)細(xì)胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以離心去掉,留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細(xì)胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細(xì)胞還是不貼壁,將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),直到問題解決。

2)對于生長緩慢的貼壁細(xì)胞:可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度,或隔日換液的方法來保證細(xì)胞的狀態(tài)和生長速度。

3)對于生長不均的貼壁細(xì)胞:在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細(xì)胞分布明顯不均時(即某一區(qū)域細(xì)胞已重疊生長,而旁邊則為一塊空白),此時可將細(xì)胞進行消化,重新打散,貼壁,加入新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。 

BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)下面介紹幾種細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的污染:

一)桿菌污染:培養(yǎng)基中加入抗生素可以減少此種污染,但也不是的。

二)支原體污染:傳說中的黑焦蟲,長得暴快。24小時就滿視野都是了。污染源大多數(shù)情況下是培養(yǎng)用血清。

三)念珠菌污染:似乎無處不在,而且頑固得很。長得暴快(12h就能在細(xì)胞上面密布)。培養(yǎng)液澄清。低倍顯微鏡下像黑色的沙子鋪在細(xì)胞上,高倍鏡下呈樹枝狀或葡萄狀。

四)霉菌污染、比較常見的一種污染,常常來源于污染的空氣、水和器械。
購買BIU-87細(xì)胞注意事項:
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落,將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜,隔天再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均會貼壁,若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細(xì)胞活力,如果證實細(xì)胞活力正常,請將BIU-87細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力,請拍下照片及時和我們聯(lián)系,信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通交流。

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