A2780/Taxol-LUC人卵巢癌紫杉醇耐藥株-熒光素酶標記細胞 已經通過STR鑒定
產品規格：一株（瓶裝）
培養細胞常見問題分析：
13209扭轉原腸胚形成同源物1（TWSG1）檢測試劑盒（酶聯免疫吸附試驗法）ELISA Kit for Twisted Gastrulation Protein Homolog 1 （TWSG1）48T/96THomo sapiens （Human）
13210端粒酶逆轉錄酶（TERT）檢測試劑盒（酶聯免疫吸附試驗法）ELISA Kit for omerase Reverse Transcriptase （TERT）48T/96THomo sapiens （Human）
13211BMP結合內皮調節因子（BMPER）檢測試劑盒（酶聯免疫吸附試驗法）A2780/Taxol細胞ELISA Kit for BMP Binding Endothelial Regulator （BMPER）48T/96THomo sapiens （Human） 

13212基質金屬蛋白酶14（MMP14）檢測試劑盒（酶聯免疫吸附試驗法）ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 14 （MMP14）48T/96TMus musculus （Mouse） 

1）與細胞系有什么區別？
細胞培養物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據傳統定義，*次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. （1987）. Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. （New York, Alan R. Liss, Inc.）]. 這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內需掌握好細胞zui大的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的*性。
細胞系是不斷生長，分化的細胞群，因其經過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫療或科研。實際上，連續細胞系可以用大量次培養基培養，隨著代數的增加細胞的基因型和表型都有可能發生改變。

需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。

2）倍增和代數有什么區別？

倍增是培養物中細胞總數加倍，通常是指細胞指數或對數生長期。代數是指細胞群從培養瓶中移出，傳代培養過程的次數，傳代培養的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

3）接收到的凍存細胞該如何處理？

收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

4）有多少經驗才能開始正常人類細胞培養？

推薦有經驗者在無菌環境下用層流凈化罩工作，如果有經驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養的初學者或打算建立細胞培養實驗室，我們會為你提供幫助。請的細胞培養專家。

5）凍存的細胞該如何開始培養？
⑴將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。

⑵用10秒鐘時間將小管的蓋子擰松1/4以去除殘留在螺紋處的液氮，然后將蓋子蓋緊。

⑶將小管放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉，直到管內物體*融化。

⑷將小管立即從水浴中拿出，擦干，轉入無菌環境。

⑸用70％的酒精沖洗小管，然后擦去多余酒精。

⑹打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋。用1ml離心管離心內容物。
⑺平衡管內物，用多聚賴氨酸包被培養瓶（多數細胞用T-75的培養瓶）。多數細胞類型推薦接種密度為每平方厘米5000細胞。

⑻蓋好蓋子，輕輕搖晃培養瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。

⑼將培養瓶放放培養箱中（37℃,5%CO2,95%空氣）

⑽植入培養后第6-16小時更換一次培養基以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。

A2780/Taxol-LUC人卵巢癌紫杉醇耐藥株-熒光素酶標記細胞
?
?轉染方法與標記過程的描述 慢病毒轉染Hygromycin篩選 
1.質粒部分
1.酶切載體：pGL4.10（luc2）由酶切獲得1400bp的luc2基因片斷；EGFP和mCherry片段由PCR擴增獲得700-800bp左右片段；pSin-hyg-T2A載體酶切線性化。
2.電泳和膠回收：上述酶切產物DNA電泳，TAKARA試劑盒膠回收，回收產物取少量電泳鑒定。
3.連接載體與目的片段:使用Invitrogen T4連接酶連接luc2、EGFP或mCherry片段和pSin-hyg-T2A線性化載體，連接使用20ul體系，25℃，10min。
4.轉化：感受態菌One Shot Stbl3在冰上融化后，加入連接產物，靜置25min后在水浴42℃，45sec熱休克，后加入250ul無抗培養基225轉搖菌1h，將轉化的菌鋪于有氨芐抗性平板37度過夜。
5.挑取單克隆：觀察平板后挑取15個單克隆至含2ml氨芐抗性 LB培養基搖菌管中，255轉搖菌6.5h。
6.小抽質粒與鑒定：使用堿裂解法小抽，質粒用25ul含RNA酶ddH2O溶解；酶切鑒定: 重組質粒用通過酶切鑒定。
7.熒光素表達鑒定: 重組質粒pSin-hyg-GFP/luc2（以下簡稱Gluc）或pSin-hyg-mCherry/luc2（以下簡稱Mluc） 轉染293T細胞：DNA定量后，使用PEI轉染Gluc或Mluc至24孔板已預鋪的293T細胞中。轉染采用脂質體法轉染，試劑采用JetPEI (Polyplus公司)。兩管EP管中分別加入50ul生理鹽水，其中一管加入1ug量的質粒（DNA體積=1ug/DNA濃度），輕輕震蕩混勻，再輕微離心；在另一管中加入PEI 2ul輕輕震蕩混勻，輕微離心，然后把PEI管中的溶液加入含有的質粒管中，室溫孵育20min。將脂質體包繞DNA的混合液加入需要轉染的24孔內，37 ℃、5 % CO2條件下培養，8小時后換培養液。
8.報告基因檢測：Passive Lysis Agent裂解細胞，加入熒光素酶作用底物，將轉染質粒的細胞與陰性，陽性對照共同進行單報告基因檢測。
9.質粒中抽：取1ml轉染報告基因檢測正確的菌液加入100ml氨芐抗性的LB培養基中搖菌過夜，使用Invitrogen試劑盒中抽，產物電泳鑒定，－20℃保存。
1.慢病毒包裝部分
1. 質粒共轉染細胞：轉染前一天，293T在10cm培養盤中的細胞達到90％，胰酶消化后，1：3傳入新10cm培養盤中。轉染時，細胞在培養盤中密度達到80％。采用脂質體PEI轉染法使編碼慢病毒包膜蛋白的質粒VSV G, Packaging Mix以及構建的Gluc或Mluc質粒15µg共轉染。6h后換新鮮DMEM培養基。
2．提取病毒上清：轉染48-72hours后，將含有病毒液的培養基轉移到15ml離心管中,在低溫4攝氏度條件下，3000rpm，離心10min去除片狀沉淀的細胞碎片。
3．濃縮病毒：將病毒上清用0.45um濾器過濾至濃縮離心管中，2000rpm，4℃，15min離心。濃縮液收集于500µl離心管中，-80℃保存。