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懸浮細胞:一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

NIH/3T3（NIH-3T3）, 小鼠成纖維細胞系

培養(yǎng)條件
DMEM培養(yǎng)基(添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%
溫度：37攝氏度

 NIH/3T3（NIH-3T3）, 小鼠成纖維細胞系描述

細胞生長：貼壁生長
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
細胞數(shù)量：1×106個
細胞傳代：當細胞生長至80%或80%以下匯合時即可傳代，切勿達到匯合；1:3~1:6傳代，每周2次
細胞特性：NIH/3T3是從NIH Swiss小鼠胚胎培養(yǎng)物中建立的高度接觸性抑制的連續(xù)傳代細胞株。為了培育在形態(tài)學特征上更適合于進行轉化分析的亞株，建立的NIH/3T3細胞株又進行了5輪以上亞克隆。該細胞株對肉瘤病毒的轉化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感，對DNA轉化及轉染研究十分有用。鼠痘病毒陰性。
細胞純度：92％
細胞活力：88％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細胞檢測：細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
細胞凍存：液氮凍存（基礎培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS）
細胞運輸：干冰運輸（1 Vial）或活細胞運輸（T-25 flasks）
細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療

產(chǎn)品優(yōu)勢

NIH-3T3-LUC小鼠成纖維細胞-熒光素酶標記 分離自腦組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面，即外側面（約占整個皮質面積的1/3）、內側面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。小膠質細胞是神經(jīng)膠質細胞的一種，相當于腦和脊髓中的巨噬細胞，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中的道也是*主要的一道免疫防線。小膠質細胞大約占大腦中的神經(jīng)膠質細胞的20%，小膠質細胞不停地清除著中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的損壞的神經(jīng)，斑塊及感染性物質。無數(shù)臨床上和神經(jīng)病理學研究表明激活的小膠質細胞在神經(jīng)退化類疾病的發(fā)病機理中起到十分重要的作用，如帕金森病、多發(fā)性硬化和阿茲海默癥等。但是過多激活或失控的小膠質細胞會引起神經(jīng)毒性。它們是促炎因子和氧化應激的重要來源，如腫瘤壞死因子（TNF），一氧化氮，白介素等有神經(jīng)毒性的物質。神經(jīng)小膠質細胞的主要功能：①神經(jīng)膠質出現(xiàn)在大腦發(fā)育早期向成熟階段轉化的過程中；②當程序性細胞死亡時，或在大腦發(fā)育的過程中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損或受到病理損壞時，神經(jīng)膠質可做為大腦的巨噬細胞；③膠質細胞能在Ⅱ類組織相容性復合體表達CD-4陽性T細胞時表達抗原，能進行Fc介導的巨噬作用，并且與造血細胞和巨噬細胞組織共享抗原。

本公司培養(yǎng)的細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經(jīng)PCK/TG免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

參數(shù)規(guī)格

 1） 含量：>1x106 個/mL

 2） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

 3） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：

 （1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

 （2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

 （3）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。

 用途：僅供科研使用。

NIH-3T3-LUC小鼠成纖維細胞-熒光素酶標記

 1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

 2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

 3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基。

 4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。

 5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們取得聯(lián)系。

  細胞培養(yǎng)步驟

 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

 1） 準備L-15培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，100%。 溫度：37攝氏度。

 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

 二． 細胞處理：

 1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

 對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

 1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

 2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

 3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

 4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 注：次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

 3） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

 下面T25瓶為例；

 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至*終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

 3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 NIH-3T3-LUC小鼠成纖維細胞注意事項

 1.收到NIH-3T3-LUC小鼠成纖維細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

 2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。

 3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細胞后一周內的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

 4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

合作單位

經(jīng)過多年的不懈努力，我公司合作的單位有：復旦大學華山醫(yī)院，中山醫(yī)院，山西中醫(yī)藥大學：貴州達靈藥業(yè)，武漢巴菲爾生物，杭州啟新生物，容大生物，鄭州大學，東南大學，成都華健未來生物，同濟大學，廣州中醫(yī)藥大學，河南大學，上海大學，柳岸生物技術有限公司，中山大學附屬第三醫(yī)院等等。。。。。。