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人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒操作步驟

來源:上海琛藝實業有限公司   2019年12月31日 10:18  

訂購人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)酶聯免疫試劑盒品牌公司提供ELISA試劑盒免費代測服務,提供完整的售前售中和售后服務。公司旨在為客戶提供*質的產品和服務,歡迎廣大客戶咨詢訂購!

中文名:人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒

別名:人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA Kit

供應商:上海琛藝實業有限公司

規格:48t/96t

保存:2-8℃

有效期:6個月

特點:敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩定、易保存,操作簡便。

用途:用于測定血清,血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。

檢測種屬:大小鼠、人、豚鼠、兔子、豬、犬、牛羊、雞鴨ELISA試劑盒等種屬。

常見ELISA試劑盒:白介素、選擇素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子、干擾素、轉化生長因子、趨化因子、細胞因子受體、粘附分子、生長因子、凋亡因子等等。

適用范圍:僅用于科研實驗,禁用于臨床。

 

人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒

 

 

 

本司ELISA試劑盒性能特點:

 

(1)、*試劑——高效性、靈敏性、特異性

(2)、規范包被操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高

(3)、*的優化方案——回收利用率高、可靠性強

(4)、適用范圍——適用于體液、組織勻漿,細胞培養上清液、尿液等各種類型的樣本。

(5)、可檢測指標齊全——生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質金屬蛋白酶等等

 

 

 

人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法:

1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3. 細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

 

 

人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA檢測試劑盒免費代測注意事項:

1.試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

2.實驗中不用的試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

3.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

4.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

5.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

6.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

7.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

8.底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

9.加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

10.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒操作步驟

實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。

3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。

5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

 

三、人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒標本要求

 

1.  血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

2.  血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

 

注:標本溶血會影響*后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。 

人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)ELISA試劑盒品牌技術流程:

 

     雙抗體夾心法(檢測未知抗原)             間接法(檢測未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次。

2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。 1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。

2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)

3、加酶標抗體:于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,*一遍用DDW洗滌。

4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

人抑絲蛋白1(PFN1)elisa酶聯免疫試劑盒品牌操作步驟:

1、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

2、溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

3、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

4、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此

重復5次,拍干。

5、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

6、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

10 分鐘.

7、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

8、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

公司常年代理德國TSZ品牌、Mercodia品牌、Panbio品牌、Alpco品牌、CST品牌、IBL-America品牌、AbFrontier品牌、Calbiotech品牌、Anogen品牌、Ani Biotech品牌、AAT Bioquest品牌、Jaica品牌等ELISA試劑盒。

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