石蠟切片神經纖維比耳朔夫斯基（Bielschowsky）銀染試劑盒產品說明書

（中文版）

主要用途

 石蠟切片神經纖維比耳朔夫斯基（Bielschowsky）銀染試劑是一種旨在使用標準化的化學分離石蠟方法和銀還原技術，分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中神經纖維、軸突、神經原纖維纏結和老年斑形態學的*而經典的技術方法。該技術經過精心改良比耳索夫斯基（Bielschowsky）方法、成功實驗證明的。主要適用于石蠟包埋的腦組織或外周神經組織切片的相關纖維組織檢測。廣泛用于腦神經病理生理解剖學的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。

技術背景

神經纖維對于銀離子敏感。通過嗜銀染色，神經纖維還原離子銀為可見金屬銀沉積，呈現黑色。

產品內容

 去石蠟液（Reagent A）       毫升 (自備)

 補水液A（Reagent B）  毫升

 補水液B（Reagent C）  毫升

 補水液C（Reagent D）  毫升

 補水液D（Reagent E）  毫升

 清理液（Reagent F）  毫升

 染色液（Reagent G）  毫升

 中和液（Reagent H）  毫升

 顯色液A（Reagent I）  毫升

 顯色液B（Reagent J）  毫升

 終止液（Reagent K）  毫升

 平衡液（Reagent L）  毫升

產品說明書  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

小型玻璃染色缸：用于石蠟切片的去石蠟和染色操作

中性樹脂：用于切片封片

光學顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實驗步驟

• 去石蠟處理

• 取出10片待測的10微米厚的石蠟包埋的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時，此步很重要）
• 按下表依次放進小染色缸里孵育

• 小心移去切片上的 補水液D（Reagent E）

二、 樣本染色處理

• 小心加上xx微升 染色液（Reagent G），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下至少孵育15分鐘（注意：可見切片呈現淺棕色）
• 小心移去切片上的 染色液（Reagent G）
• 室溫下，小心將切片置入xx毫升 補水液D（Reagent E）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的 補水液D（Reagent E）
• 移取xx毫升 染色液（Reagent G）到5毫升玻璃管里
• 一滴一滴（25微升一次）加入 中和液（Reagent H），直至溶液澄清，標記為 染色強化液
• 小心加上xx微升上述 染色強化液，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下至少孵育30分鐘，直至切片呈現深棕色
• 小心移去切片上的 染色強化液

三、 樣本顯色處理

• 準備1個1.5毫升離心管
• 加入xx微升 顯色液A（Reagent I）和xx微升 顯色液B（Reagent J），混勻，標記為 顯色工作液
• 小心加上xx微升 顯色工作液在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘，直至出現黑色為止（注意：顯微鏡下觀察后繼續下列操作）
• 即刻移去切片上的 顯色工作液
• 即刻加上xx微升 終止液（Reagent K）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育1分鐘
• 小心移去切片上的 終止液（Reagent K）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升 清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent F）
• 即刻加上xx微升 平衡液（Reagent L）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的 平衡液（Reagent L）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升 清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent F）
• 小心加上xx微升 補水液B（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 小心移去切片上的 補水液B（Reagent C）
• 小心加上xx微升 補水液A（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 小心移去切片上的 補水液A（Reagent B）
• 小心加上xx微升 去石蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 小心移去切片上的 去石蠟液（Reagent A）
• 放上蓋玻片或封片（中性樹脂）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：神經纖維、軸突、神經原纖維纏結和老年斑呈現金黑色，切片背景呈現黃色或棕色

注意事項

• 本產品為50次操作
• 操作時，須戴手套
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
• 建議使用玻璃染色缸
• 石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時，否則造成樣品支離破碎
• 加入 中和液（Reagent H），須達到飽和狀態，臨飽和前，加10微升，混勻后可見黃褐色；再加10微升，混勻后澄清為止。不宜多加，如果多加，可以回加 染色液（Reagent G）
• 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
• 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
• 樣品染色避免過度：10微米切片可能看不見很深的棕色，而30微米切片可見明顯深棕色
• 使用 顯色工作液時，有時反應短至2至5分鐘之內，總之以出現黑色為準，通過顯微鏡觀察確定
• 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 樣品染色后保存，避免光照
• 本公司提供系列組織細胞神經系統成分染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰