上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發、生產、經營為一體的專業化生物工程公司。公司新引進細胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。
產品名稱:U-2OS細胞|人骨肉瘤細胞U-2OS 含STR
特點:細胞代數為4代以內,細胞耐藥倍數8倍以上;
包裝:內層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細胞后12天,如發現細胞有質量問題(如污染,死亡,快遞運輸等原因)時,應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員,我們將盡快為您解決!
注:耐藥細胞培養操作流程和普通細胞培養方法基本一致,只是在培養中會加藥維持篩選壓力
- U-2OS細胞|人骨肉瘤細胞U-2OS 含STR
- 三、細胞生長條件:
- 組成:
組份 | 數目 |
細胞 | 1 T-25瓶 |
細胞說明書 | 一份 |
- 細胞簡介:
生長特性: | 貼壁生長
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細胞來源: | 從ATCC/中科院/協和醫院等地引進 |
培養條件: | 培養基:90%1640培養基 +10%FBS(推薦BI -04-001-1ACS*胎牛血清) 氣相:空氣95%,二氧化碳5% 溫度:37℃ |
培養: |
1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,將其平躺置于培養箱中進行2-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養基并置于細胞培養箱中培養,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代; 2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳代,第yi次傳代比例為1:2。 3傳代步驟:將0.25%含EDTA胰酶置于37°預熱,倒掉培養瓶中的培養基,往培養瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預熱好的胰酶,置于37°孵育消化(第yi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為*消化時間,記錄*消化時間,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養基重懸細胞,進行傳代。
二、懸浮細胞 1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,然后置于無菌操作臺,打開瓶口,輕輕吹打后,將其中的細胞懸液轉移到離心管中,然后1200rpm離心3min,去上清; 2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鮮培養基,然后將其置于細胞培養箱中培養,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液(離心后去舊液,加入新鮮培養基); 3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時,對其進行傳代,第yi次傳代比例為1:2(離心后平均分成兩瓶培養)。
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細胞總數: | 1~3*106 |
傳代周期: | 2-3天 |
傳代比例: | 1:2~1:4 |
換液頻率: | 2-3天 |
凍存液: | 90%FBS+10%DMSO |
五、細胞培養步驟
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中,加入約6ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1、貼壁細胞,傳代參考如下:
①. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
②. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
③. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
④. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
2、懸浮細胞,傳代參考如下:
方法①:收集細胞,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法②:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進行離心收集,1000RPM條件下離心5分鐘,去除上清,按凍存數量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
剛收到細胞時,胎牛血清可以用15%培養兩三天,利于細胞盡快恢復狀態,細胞穩定后
再調回10%即可
收到細胞后如細胞狀態不佳,或培養中遇到問題,煩請當天盡快聯系,以便處理。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要參考依據,請您務必重視。
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