ELISA試劑盒實驗中每一個步驟都尤為重要，細節不容忽視，它是實驗成功的關鍵與否；在這里本司為方便各位了解，更好的完成實驗，特對高靈敏ELISA試劑盒操作步驟中的忌諱做出以下分析，供大家參考：

1.吸取液體時速度不易太快，以免產生氣泡，吸取的量不夠準確。

2.手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。

3.底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應盡量避免接觸皮膚。

4.加樣后及時放人孵箱，標本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。

5.作時必須戴手套，穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度。

6.剩余樣品及廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

7.同批號試劑組分不得混用。

8.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

9.每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。

10.要確保微量加樣器的準確性，可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質，溫度環境為20%左右時，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應該將其zui高量程和zui低量程進行確定。

11.在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。

12.檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結和分析問題的能力，對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決。

13.操作前仔細閱讀說明書，嚴格按照說明書要求進行規范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方，反復試驗確定成立后才能改進，比如洗板次數的掌握等。

14.評估試劑的實用性，試劑的穩定與否，對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。

15.加樣要準確、快速。加樣不準確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結果。另外，顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關，所以加樣應慎重。要求在一定時間內加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。

16.使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要

17.嚴格掌握顯色時間，顯色時間過短，加入終止液反應終止后，底物結合物的量過少，易出現假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應判為假陽性，這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結果。

18.洗滌*，洗板不*，酶結合物本底顯色會呈現假陽性。另外，洗滌液要新鮮，現用現配，陳舊的洗滌液會出現本底增高現象，也可能出現假陽性。

19.嚴控反應時間，反應時間過長，酶失活；反應時間過短，酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合，生成物結構松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。

20.ELISA檢測操作步驟復雜，可強各環節的質量控制，才能得到準確可靠的檢測結果。