Caco2細胞|人結(jié)腸癌細胞Caco2 含STR鑒定

Caco-2/人結(jié)腸癌細胞的介紹

背景及概述：

結(jié)腸腺癌是發(fā)生于結(jié)腸粘膜上皮的惡性腫瘤。癌細胞形成大小不等、形狀不一、排列紊亂的腺樣結(jié)構(gòu)。癌細胞常為多層排列，核大小不一，核分裂像多見。。Caco-2/人結(jié)腸腺癌細胞分離自直腸原位癌。當(dāng)長到滿時，細胞表現(xiàn)出特征性的腸上皮細胞分化。Caco-2/人結(jié)腸腺癌細胞表達維甲酸結(jié)合蛋白I和維甲酸結(jié)合蛋白II，并呈角質(zhì)蛋白陽性。培養(yǎng)基為IMDM培養(yǎng)基，添加2mML-谷氨酰胺和Earle'sBSS，含1.5g/L碳酸氫鈉，0.1mM非必需氨基酸，和1.0mM丙酮酸鈉，80%；FBS，20%。有實驗研究中藥化學(xué)成分鹽酸黃連堿(coptisinechloride，COP)和小檗紅堿(berberrubine，BRB)在人腸的吸收。

Caco-2/人結(jié)腸腺癌細胞主要用于科學(xué)研究，有實驗采用Caco-2/人結(jié)腸腺癌細胞單層模型研究COP和BRB由絨毛面(AP側(cè))到基底面(BL側(cè))、BL側(cè)到AP側(cè)兩個方向的轉(zhuǎn)運過程。結(jié)果顯示COP和BRB由AP側(cè)到BL側(cè)的表觀滲透系數(shù)(Papp)分別為(1.103±0.162)×10-5，(1.309±0.102)×10-5cm.s-1；由BL側(cè)到AP側(cè)的Papp分別為(0.300±0.041)×10-5，(1.955±0.055)×10-5cm.s-1，與在Caco-2/人結(jié)腸腺癌細胞單層模型上呈良好吸收的陽性對照藥普萘洛爾[(2.23±0.10)×10-5cm.s-1]的基本一致。因此COP和BRB可以通過小腸上皮細胞被動吸收進入體內(nèi)，屬于良好吸收的藥物，在兩者的吸收轉(zhuǎn)運過程中，油/水分配系數(shù)起著關(guān)鍵性的作用；BRB在Caco-2/人結(jié)腸腺癌細胞單層模型中的轉(zhuǎn)運可能存在外流機制。

而本公司培養(yǎng)的細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經(jīng)PCK/TG免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

人結(jié)腸癌細胞Caco2參數(shù)規(guī)格

 1） 含量：>1x106 個/mL

 2） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

 3） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式：

 （1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

 （2）存活細胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

 （3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。

 用途：僅供科研使用。

Caco2細胞|人結(jié)腸癌細胞Caco2 含STR鑒定

 1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

 2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

 3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基。

 4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。

 5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

  細胞培養(yǎng)步驟

 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

 1） 準備L-15培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。

 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，100%。 溫度：37攝氏度。

 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

 二． 細胞處理：

 1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

 對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

 1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

 2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

 3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

 4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 注：次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

 3） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

 下面T25瓶為例；

 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至*終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

 3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

人結(jié)腸癌細胞Caco2 細胞培養(yǎng)注意事項

 1.收到Caco2細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

 2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。

 3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

 4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

合作單位

經(jīng)過多年的不懈努力，我公司合作的單位有：復(fù)旦大學(xué)華山醫(yī)院，中山醫(yī)院，山西中醫(yī)藥大學(xué)：貴州達靈藥業(yè)，武漢巴菲爾生物，杭州啟新生物，容大生物，鄭州大學(xué)，東南大學(xué)，成都華健未來生物，同濟大學(xué)，廣州中醫(yī)藥大學(xué)，河南大學(xué)，上海大學(xué)，柳岸生物技術(shù)有限公司，中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院等等。。。。。。

上海琛藝實業(yè)有限公司是一批由美國留學(xué)歸來的致力于服務(wù)中國生物領(lǐng)域的青年創(chuàng)辦的一家新型公司。公司自創(chuàng)辦以來，以的產(chǎn)品、快捷的速度和完善的售后服務(wù)，贏得生物界老師的厚愛，您選擇琛藝的理由： 產(chǎn)品齊全：囊括實驗室儀器、設(shè)備、實驗室耗材、免疫生物學(xué)試劑、動物生物學(xué)試劑、植物生物學(xué)試劑、微生物學(xué)試劑、細胞生物學(xué)試劑、遺傳學(xué)生物試劑、生物化學(xué)試劑、分子生物學(xué)試劑。 品牌齊全：囊括國內(nèi)外100多個。 方便、快捷，訂貨周期短，選擇服務(wù)質(zhì)量好的快遞，全稱跟蹤，及時到達您的手中。上海琛藝努力打造生物領(lǐng)域內(nèi)的京東商城。 平價：同等質(zhì)量的產(chǎn)品，我們這里價格實惠，為您節(jié)省每一分錢。 的售后服務(wù)：實驗過程，我們有技術(shù)全程跟蹤指導(dǎo)，若有問題，我們di一時間為您處理，保證您售后無憂。 多姿多彩的技術(shù)服務(wù)：免疫學(xué)技術(shù)服務(wù)、Western Blotting技術(shù)服務(wù)、實時熒光定量PCR(RealTime PCR)技術(shù)服務(wù)、病理學(xué)檢測技術(shù)服務(wù)等。 總之，上海琛藝是您值得信賴的地方：誠實正直，以客戶的切身利益為出發(fā)點，關(guān)注客戶，協(xié)助客戶一起成長！