產品名稱：HCT-8細胞|人結腸癌細胞HCT-8 含STR鑒定

包裝：內層無菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說明書
細胞來源：ATCC、sciencell、ICLC
貨期：1-2周
運輸方式：快遞運輸
售后：收到細胞后12天，如發現細胞有質量問題（如污染，死亡，快遞運輸等原因）時，應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員，我們將盡快為您解決！

HCT-8細胞|人結腸癌細胞HCT-8 含STR鑒定

• 三、細胞生長條件：

操作流程

1、您收到人人結腸癌細胞HCT-8后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm²培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態，然后換用新鮮*培養液繼續培養或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm²培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，*后放入37℃，5%CO₂細胞培養箱中培養；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm²培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養基重懸，接種25cm²培養瓶，于37℃，5%CO₂細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮*培養基繼續培養。

人結腸癌細胞HCT-8發貨方式：

復蘇后發貨：我們復蘇細胞后發貨，貨期一周左右，免運費。（氣溫較好建議復蘇后發貨）

凍存發貨(干冰運輸）：需額外增加干冰運費，選擇干冰運輸的我們發兩管細胞，為了保證客戶接種可靠性多發一管。（氣溫低于0℃須凍存發貨）

細胞發貨采取專業的運輸包裝，并選擇*快捷的運輸方式（順豐速運或其他空運快遞）

本公司細胞引種來源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大細胞庫、上海生化細胞所、中國科學院典型培養物保藏委員會等

細胞處理方法：

一、貼壁細胞

1、 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張）。

2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內打開外包裝。

3、嚴格遵循無菌操作規范，打開細胞培養瓶。

4、37度平衡1-2小時。

5、用移液管吸取培養基，到50ml離心管中，剩下細胞密度達到80%至90%可以傳代，如沒有達到添加6ml新鮮培養基繼續培養。

6、如果肉眼檢查上清有細胞，對50ml上清進行離心收集細胞，如果細胞連片狀態，棄掉上清對收集的細胞進行胰酶消化（1ml胰酶37度），接種培養。

二、懸浮細胞

1、接收到細胞，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張）。

2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內打開外包裝。

3、嚴格遵循無菌操作規范，打開細胞培養瓶。

4、細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒）。

5、1000rpm，5min 離心，用吸管小心吸出上清，加入培養基，重懸細胞。

6、將重懸好的細胞轉入六孔板或者細胞培養瓶種，加入新鮮培養基，置于 37℃，5%CO2 培養（大部分細胞）。

培養操作：華拓細胞培養操作指南

細胞常見問題分析：細胞培養常見問題分析

細胞在發貨前進行質檢：

1、細胞存種的活性檢測

2、細菌、真菌、霉菌污染物鏡檢

3、衣原體、支原體檢測（熒光法、培養法等）

產品質量保證及售后：

1、 細胞為三代以內，活體。運輸過程中細胞出現污染和狀態不好，我們*免費重新發貨。

2、 實驗過程中若確定是客戶問題，客戶僅需支付物流和耗材費用，我們可重新發貨。其他根據情況靈活處理。

3、 產品使用過程中，華拓生物可提供技術上的指導。

 
注意事項
人結腸癌細胞HCT-8
一，燒瓶培養的處理程序

在培養瓶中接種細胞并在培養基中*填充培養基以防止運輸過程中細胞的丟失。

1、收到后，目視檢查培養物是否有微生物污染的宏觀證據。

使用倒置顯微鏡（配備有相位傳感器），仔細檢查是否有微生物污染的證據。還檢查以確定大多數細胞是否仍然附著在燒瓶底部？在運輸過程中，培養物有時被粗略地處理，并且許多細胞經常分離并懸浮在培養基中（但仍然是可行的）。

2、如果細胞仍然附著，無菌去除5至10毫升的運輸介質。可以節省運輸媒介以重復使用。在5%℃的空氣中，在37℃下培養細胞，直到它們準備進行傳代培養。

3.如果細胞沒有附著，無菌地移除燒瓶的全部內容物，并以1000rpm離心5至10分鐘。取出運輸介質并保存。在10毫升這種培養基中重新沉淀顆粒細胞并加入25厘米的燒瓶中。在空氣中5%℃下，在37℃下孵育，直至細胞準備進行傳代培養。

二、傳代程序

體積為75厘米的燒瓶。增加或減少其他尺寸培養容器所需的分離培養基的量。

1、去除和丟棄培養基。

2.用0.25%(w/v)胰蛋白酶0.53mM EDTA溶液沖洗細胞層，除去所有含有胰蛋白酶抑制劑的血清痕跡。

3.添加2.0~3.0 ml胰酶-EDTA溶液瓶中，倒置顯微鏡下觀察細胞到細胞層分散（取決于胰蛋白酶的批）。

注意：為了避免結塊，不要在擊打或搖晃瓶子時攪拌細胞，等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進擴散。

4、加入6～8毫升的完整生長培養基，輕輕吸液，抽吸細胞。

5、在新培養容器中加入適當的細胞懸液等分試樣。

6、培養37°C培養基。

推薦栽培比為1:3∶1:4。

介質更新：每周2至3次

三、冷凍保存程序

該協議使用量在75平方厘米的瓶；比例減少或增加的其他尺寸的分離介質的培養容器的數量。

1、去除和丟棄培養基。

2。簡要沖洗細胞層0.25（w/v）trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕跡血清含有胰蛋白酶抑制劑。

3。加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中，倒置顯微鏡下觀察細胞到細胞層是分散的（通常在1到10分鐘）。

注意：為了避免結塊，不要在擊打或搖晃瓶子時攪拌細胞，等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進擴散。

4、加入6～8毫升的完整生長培養基，輕輕吸液，抽吸細胞。

5。去除胰酶EDTA溶液，將細胞懸液到離心管和旋轉約5 1000rpmfor 10分鐘。

6、低溫保存培養液中的上清液和復蘇細胞。

7、將細胞轉移至低溫瓶，1ml／瓶。

8、低溫容器中的細胞Frozen（NalgENα5100-01）

做細胞實驗的同學看過來。

選擇上海琛藝生物細胞有3個理由：

1、細胞狀態好，形態佳，易成活，是市面上比較好養的細胞之一;

2、物流迅速，復蘇好后發貨，次日就能到;

3、使用我司推薦的進口品牌血清進行培養實驗，效果更佳。

專業技術人員萬工收藏的細胞培養小技巧:

1. 買細胞要去靠譜的地方買，比如 ATCC 或者上海琛藝。一般上面會有針對細胞的介紹，這樣培養之前可以了解細胞正常生長的狀態圖、傳代、培養基的類型等。

2. 不管是買的細胞，還是別人惠贈的細胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測是否有支原體污染;迅速擴增凍存，凍存細胞復蘇后第二天*更換一次培養基。

3. 發現細胞有污染迅速處理掉，特別是當你養了很多種細胞時。細菌污染、真菌污染很容易發現，支原體污染的話，細胞會長的慢，可以買個支原體檢測的試劑盒定期檢測一下。

4. 不同細胞生長周期不同。有的生長很快，比如說 MDA-MB-231，傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經足夠了。有的又是特別慢，比如 BT474，傳代是一分二，復蘇起始的時候兩周多才能長滿。這就需要要在培養細胞的過程中多多摸索。

5. 對于嬌弱的細胞，就得細心呵護。胰酶消化不能過久，吹得時候要輕柔，離心時候也要注意轉速和時間。每天都要去看一下細胞，肉眼觀察培養基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況。記住，是每天。

     上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發、生產、經營為一體的專業化生物工程公司。公司新引進細胞上千株，其中人的已通過STR鑒定的有幾百株，歡迎各位選購。。。。。。